PEG納米微球改性去細胞瓣構(gòu)建組織工程心臟瓣膜的實驗研究.pdf

1、第一部分 丙烯?；姆种垡叶技{米微球合成
　　 第一節(jié) 不同分子量4-Arm PEG-Ac合成和鑒定
　　 目的：合成三種分子量丙烯?；姆种垡叶迹?-Arm polyethylene glycol-Acrylate,4-Arm PEG-Ac）。
　　 方法:以不同分子量四分枝聚乙二醇（4-Arm polyethylene glycol,4-Arm PEG）和丙烯酰氯為原料，通過酯化反應合成MW2,000

2、Da、5,000Da及20,000Da三種分子量4-Arm PEG-Ac。應用1H核磁共振、高效液相色譜、基質(zhì)輔助激光解吸電離、凝膠過濾色譜法鑒定該聚合物。
　　 結(jié)果：所合成聚合物純度高，分子量與設計相符，多分散性和置換度都達到要求。
　　 結(jié)論：三種不同分子量多聚物都可以進行后續(xù)實驗。
　　 第二節(jié) 不同納米微球合成和比較
　　 目的：合成三種分子量4-Arm PEG-Ac納米微球，并選擇最合適的一種

3、納米微球進行后續(xù)試驗。
　　 方法:以乳化交聯(lián)法合成納米微球，通過產(chǎn)率計算、透射電鏡、Zeta電位分析儀比較三種納米微球。
　　 結(jié)果：三種微球粒徑范圍都在20nm左右，由4-Arm PEG-Ac(MW20,000Da)所合成的納米微球產(chǎn)率最高、形態(tài)最好、粒徑最均一、分散相最多。
　　 結(jié)論：本次試驗成功合成了三種納米微球，以4-Arm PEG-Ac(MW20,000Da)為原料合成的納米微球最適合進行后續(xù)試驗。

4、
　　
　　 第二部分 納米微球改性去細胞瓣構(gòu)建復合支架
　　 第一節(jié) 納米微球改性去細胞瓣構(gòu)建復合支架
　　 目的：構(gòu)建納米微球復合支架，并證明其微觀結(jié)構(gòu)穩(wěn)定可靠。
　　 方法:以碳二亞胺鹽酸鹽（1-Ethyl-3-(3-dimethyllaminopropyl)carbodiimide hydrochloride，EDC.HCL）為交聯(lián)劑，將納米微球與去細胞瓣交聯(lián)，制備納米微球復合支架。對納

5、米微球復合支架進行HE染色觀察、掃描電鏡觀察、三硝基苯磺酸（trinitro-benzene-sulfonic acid,TNBS）法檢測自由氨基變化、湍流反應器檢測支架穩(wěn)定性。
　　 結(jié)果：電鏡下支架表面布滿納米微球，TNBS法發(fā)現(xiàn)納米微球復合支架自由氨基較單純?nèi)ゼ毎昝黠@減少，在湍流應力場作用2天后復合支架微觀結(jié)構(gòu)仍然保持。
　　 結(jié)論：成功地構(gòu)建了納米微球復合支架，其微觀結(jié)構(gòu)穩(wěn)定可靠,納米微球與去細胞瓣的結(jié)合是牢固

6、的化學鍵合。
　　 第二節(jié) 納米微球復合支架相關生物學性能研究
　　 目的：研究納米微球復合支架生物相容性、控釋特性及生物力學性能。
　　 方法：皮下包埋法研究納米微球復合支架生物相容性，酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)研究其對轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）的控釋能力，拉伸試驗研究其

7、生物力學性能。
　　 結(jié)果：納米微球復合支架皮下包埋實驗炎癥反應輕，該支架對TGF-β1包封率約為72％，從第12小時開始，表現(xiàn)出對TGF-β1明顯控釋，該支架最大應力及彈性模量高于天然瓣膜和去細胞瓣膜，維持最大應變的能力優(yōu)于去細胞瓣膜。
　　 結(jié)論：構(gòu)建的納米微球復合支架具有良好的生物相容性，對于TGF-β1具有良好的包封和控釋特性，生物力學性能優(yōu)良。
　　 第三部分 納米微球復合支架構(gòu)建組織工程心臟瓣膜

8、>　　 目的：鑒定原代培養(yǎng)肌成纖維細胞，證明包封有TGF-β1的納米微球復合支架+肌成纖維細胞（Myofibroblasts，MFBs）體外靜態(tài)培養(yǎng)方法能構(gòu)建性能優(yōu)良的組織工程心臟瓣膜（tissue engineering heart valve,TEHV）。
　　 方法：原代培養(yǎng)MFBs，直接光鏡觀察和免疫組化法鑒定，羥脯氨酸試劑盒檢測TEHV膠原含量，拉伸試驗檢測TEHV力學性能。
　　 結(jié)果：光鏡及免疫組化結(jié)果證