應用脫細胞豬主動脈瓣支架體外構建組織工程心臟瓣膜的實驗研究.pdf

1、目的:目前,國外的研究已取得一定的進展,國內(nèi)的研究還處于起步階段.該實驗以豬主動脈瓣脫細胞后構建組織工程瓣膜支架,探索豬瓣脫細胞方法,脫細胞后生物力學性能,免疫反應性的改變;然后將體外培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞種植在脫細胞的瓣葉上,觀察細胞的生長情況,探索種植細胞的適宜條件,進而將細胞種植在脫細胞的瓣膜支架上構建初級組織工程瓣膜,然后觀察細胞的生長情況,探索種植細胞的適宜條件.方法:1.脫細胞的貍主動脈瓣葉支架的制備;采用去污劑,核酸酶

2、等對豬主動脈瓣葉進行脫細胞處理;脫細胞瓣葉和新鮮瓣葉的生物力學特性測定,主要進行應力—應變、應力—松弛、拉斷實驗;脫細胞豬瓣葉、新鮮瓣葉和常規(guī)戊二醛處理的瓣葉的免疫原性的比較.2.組織工程瓣膜構建中細胞種植的實驗研究;將體外培養(yǎng)的細胞種植在脫細胞豬主動脈瓣葉支架上:①種植新生牛主動脈內(nèi)皮細胞(BAECs):觀察細胞在瓣葉支架上的生長方式,細胞分泌PGI<,2>性能的變化;②種植新生牛主動脈血管平滑肌細胞(SMCs):觀察細胞在支架上的生

3、長方式;③首先種植SMCs,然后復合種植BAECs:觀察細胞在支架上的生長方式及內(nèi)皮細胞分泌PGI<,2>性能的變化.3.初級組織工程瓣膜的體外構建;將帶一部分升主動脈的豬主動脈瓣進行脫細胞處理,觀察瓣膜和主動脈的脫細胞效果.將BAECs種植在整個脫細胞豬瓣上,觀察細胞在整個瓣膜支架上的生長情況;并將SMCs和BAECs復合種植在瓣膜支架上,觀察細胞的生長情況.結論:1.應用胰酶、EDTA、1％Triton X-100、RNase和DN

4、ase可以完全去除豬瓣組織中的細胞,脫細胞過程并不影響瓣葉的生物力學性能,脫細胞后的瓣葉組織免疫反應性比新鮮瓣葉和常規(guī)戊二醛處理的瓣葉明顯降低,這種脫細胞豬主動脈瓣能夠用來構建組織工程心臟瓣膜.2.不同的細胞種植在脫細胞瓣葉上有著不同的生長方式,BAECs單獨種植在支架上時呈單層生長;SMCs單獨種植時呈多層生長;首次在脫細胞瓣膜支架上行SMCs和BAECs復合種植,細胞在支架上生長良好,BAECs在SMCs表面形成單層生長.3.SMC