球孢白僵菌殺線蟲活性物質(zhì)分離純化研究.pdf

1、沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文球孢白僵菌殺線蟲活性物質(zhì)分離純化研究姓名：劉丹丹申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：段玉璽20070601沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要本文以對甘薯莖線蟲(Ditylenchusdestructor)具有毒殺作用的球孢白僵菌(Beauveriabassiana)菌株snt90776的發(fā)酵液為材料，采用現(xiàn)代分離純化技術(shù)對殺線蟲活性組分的分離工藝進行探索研究，取得了如下結(jié)果：1明確了球孢白僵菌srⅡ90776產(chǎn)

2、生殺線蟲活性物質(zhì)的最佳發(fā)酵時間和初步提純的方法：試驗結(jié)果表明球孢白僵菌sn_f90776殺線蟲物質(zhì)最高產(chǎn)出量的發(fā)酵時間為8天，所獲得的發(fā)酵液活性物質(zhì)效價(ED50)為O84111g／mL。發(fā)酵液預(yù)處理研究結(jié)果表明，無水乙醇直接沉淀法能夠有效、快速、簡便地除去其中大部分雜質(zhì)，為分離活性物質(zhì)奠定了基礎(chǔ)。2發(fā)酵液殺線蟲活性物質(zhì)的理化性質(zhì)進行了系統(tǒng)研究：在捷克Doskchilova溶劑系統(tǒng)中，殺線蟲活性物質(zhì)的極性較強，在有機溶劑中Rf值很小，具

3、有堿性水溶性抗生素的性質(zhì)。在Betina溶劑系統(tǒng)中，將其歸為I類Ia亞類。pH層析試驗中，隨著pH值的增大，活性物質(zhì)的Rf值也逐漸增大曲線呈S行，與堿性抗生素pH層析圖譜一致。紙電泳試驗中，活性物質(zhì)在pH=4的緩沖液中，向負極移動，說明其電離后帶有正電荷；在pH=8的緩沖液中，不移動，與電泳圖譜對照，表明殺線蟲活性物質(zhì)是弱堿性抗生素。理化性質(zhì)研究表明，該發(fā)酵液中的殺線蟲活性物質(zhì)具有耐熱、耐酸堿、耐光照、耐貯藏等特，這種殺線蟲活性物質(zhì)具有

4、生產(chǎn)和應(yīng)用上的優(yōu)勢。3對發(fā)酵液中活性物質(zhì)的分離縫化工藝進行了大量研究，通過有機溶劑萃取、活性炭吸附層析、732陽離子樹脂交換層析、硅膠層析、SephadexLH20層析等方法，最終獲得離純度的殺線蟲活性物質(zhì)。每個步驟都用時薯莖線蟲(Ditylenchusdestructor)作活體檢測、玻璃板點樣檢測、薄層層析檢測等，防治效價降低。最終分離物通過紫外一可見光譜掃描和高效液相色譜測定其純度達到100％。4活性物質(zhì)的殺線蟲活性測定和抑菌測定