殺松材線蟲海洋真菌H-21的分離鑒定、培養(yǎng)條件及其活性物質研究.pdf

1、松萎蔫?。╬ine wilt disease，PWD)是松樹病害中的一種毀滅性的病害，對全球松林構成了巨大的威脅。針對松萎蔫病的病原生物松材線蟲，本文對采自青島附近海域的樣品進行真菌分離，并采用浸漬法對分離得到的22株真菌的培養(yǎng)濾液進行殺線蟲活性測定，從這些菌株中篩選得到了1株具有高殺松材線蟲活性的真菌H-21，該菌株分離自貽貝。通過形態(tài)學觀察和18S rDNA序列分析，將菌株H-21鑒定為Leucostoma sp.，用其培養(yǎng)液處理松

2、材線蟲72 h時，線蟲的校正死亡率可達90.07％。對H-21的培養(yǎng)條件進行了單因素和正交實驗研究，確定菌株H-21在PD培養(yǎng)基中產生殺線活性物質最佳的培養(yǎng)條件是：100%海水濃度，初始pH值6.0，培養(yǎng)溫度25℃，培養(yǎng)時間5 d。對菌株H-21殺線活性物質的穩(wěn)定性進行了初步測定，確定其活性物質具有熱穩(wěn)定性以及在弱酸性條件下殺線活性穩(wěn)定的特點。對菌株發(fā)酵液進行殺線活性組分分析，結果表明菌株培養(yǎng)濾液的乙酸乙酯萃取相具有很強的殺線活性，72

3、 h的殺線活性可以達到100%。利用硅膠柱層析、凝膠色譜柱層析和HPLC等對乙酸乙酯相進行進一步分離純化后，得到7種單體化合物，其中一種化合物在其濃度為1.0 mg/mL時殺線活性為80.68%。通過質譜及核磁共振波譜等現代波譜技術將該化合物確定為fusarentin6,7-methyl ether，是一種fusarentin類殺蟲藥物。本研究可為從海洋真菌活性物質中開發(fā)高效、低毒的微生物源殺線蟲劑及其在松萎蔫病防治方面的應用提供理論依