產抗TMV活性物質鴉膽子內生真菌的分離、鑒定及發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、本論文以傳統(tǒng)中藥植物鴉膽子為材料，對其不同器官中的內生真菌進行分離，對分離到的內生真菌通過液體搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，獲得相應的代謝產物，以煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus, TMV）為靶標，對各菌株次生代謝產物的抗TMV活性進行測定，篩選出對TMV侵染和增殖均有抑制作用的菌株，并對該菌株進行鑒定，優(yōu)化菌株產活性物質的發(fā)酵條件，分離、純化菌株代謝產物中抗TMV活性物質，主要結果如下：
　　從鴉膽子的根、莖、葉和花中共分

2、離到內生真菌138株，其中根中分離到38株，從莖中分離到45株，葉子中45株，花中10株。將138株真菌在25℃、120 r/min的條件下液體搖瓶發(fā)酵后，采用圓葉片法對內生真菌發(fā)酵液粗提物抑制TMV增殖活性進行篩選。結果表明，其中39株內生真菌的發(fā)酵液提取物在1 mg/mL濃度下抑制TMV增殖活性，達50％以上，菌株R11的抑制效果最好，抑制率可達75.4%。
　　對TMV增殖抑制率達50%以上的39株菌株發(fā)酵提取物，采用半葉枯

3、斑法測定其抑制TMV侵染活性，每株菌重復5次，結果表明，有25株內生真菌的發(fā)酵液提取物在1 mg/mL濃度時，對TMV侵染抑制率達80%以上?；钚宰詈玫哪苓_到100%。
　　采用形態(tài)學鑒定和ITS序列測定，將對TMV侵染和增殖抑制效果最好的菌株R11鑒定為曲霉屬、黑曲霉菌。
　　通過發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選實驗，選用沙氏培養(yǎng)基作為發(fā)酵基礎培養(yǎng)基進行優(yōu)化。經單因素優(yōu)化試驗和正交試驗，確定了R11產抗TMV活性物質的最佳發(fā)酵條件為，碳源

4、蔗糖30 g/L，氮源酵母粉15 g/L, CaC121.5 g/L、發(fā)酵時間15 d,溫度28℃，125 r/min，初始 pH值6，接種量15%，裝瓶量250 mL的三角瓶120 mL。發(fā)酵優(yōu)化后的發(fā)酵液粗提物在1 mg/mL時，抗侵染抑制率為97.26%,較優(yōu)化前提高了2.1%，抗增殖抑制率為82.91%，較優(yōu)化前提高了7.56%。通過發(fā)酵優(yōu)化實驗，我們提高了菌株R11抑制TMV病毒活性物質的能力，為該菌株的進一步開發(fā)奠定了研究基