內(nèi)生真菌產(chǎn)鬼臼毒素類(lèi)物質(zhì)發(fā)酵條件的研究.pdf

1、鬼臼毒素類(lèi)物質(zhì)因具有顯著的抗病毒、抗腫瘤活性，在醫(yī)藥領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值。目前該類(lèi)物質(zhì)的獲得主要是從植物中提取，但天然植物資源有限，無(wú)法滿(mǎn)足市場(chǎng)需求，利用植物內(nèi)生真菌可產(chǎn)生與宿主相同代謝物的特性，通過(guò)微生物發(fā)酵獲得該類(lèi)物質(zhì)，為獲得鬼臼毒素類(lèi)原料藥物質(zhì)資源提供了新途徑。目前這方面的研究多集中于對(duì)有價(jià)值菌株的篩選。本研究對(duì)已獲得的可產(chǎn)生鬼臼類(lèi)物質(zhì)菌株Md的發(fā)酵條件進(jìn)行研究，以期為用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)藥用植物活性成分提供參考。 目的：

2、對(duì)可產(chǎn)生鬼臼毒素類(lèi)物質(zhì)內(nèi)生真菌進(jìn)行發(fā)酵研究，為解決鬼臼類(lèi)抗癌藥物短缺提供新的途徑；并通過(guò)研究獲得用微生物發(fā)酵生產(chǎn)藥用植物活性成分的工藝數(shù)據(jù)，為實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。 方法：利用薄層層析、薄層色譜掃描、高效液相色譜、氫核磁共振確定菌株Md、Iy發(fā)酵培養(yǎng)物中的目的成分；設(shè)計(jì)了適于菌株Md、Iy生長(zhǎng)的半合成發(fā)酵培養(yǎng)基并分別優(yōu)化了其搖瓶發(fā)酵條件。L9(3<'4>)正交試驗(yàn)優(yōu)化了從菌株Md發(fā)酵培養(yǎng)物中提取鬼臼類(lèi)物質(zhì)的提取條件。

3、結(jié)果：確定菌株Md可產(chǎn)生鬼臼毒素，菌株Iy可產(chǎn)生鬼臼毒素葡萄糖甙；經(jīng)優(yōu)化后的半合成發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：2％淀粉、2％蔗糖、0.2％蛋白胨、0.2％硫酸銨，0.1％酵母膏、0.02％K<,2>HPO<,4>、0.02％CaCO<,3>、0.02％NaCl，水100ml，pH 6.8。采用該發(fā)酵培養(yǎng)基，Md菌株生物量提高約34.7％，鬼臼毒素產(chǎn)量提高約13.9％。Md菌株優(yōu)化后的搖瓶發(fā)酵條件是：初始pH6.0，裝液量100mL/250mL三角

4、瓶，接種量15％，28℃培養(yǎng)7天；菌株Iy優(yōu)化后的搖瓶發(fā)酵條件是：初始pH6.5，裝液量80mL/250mL三角瓶，接種量10％，28℃培養(yǎng)6天。菌株Md 50L發(fā)酵罐放大試驗(yàn)表明菌體生長(zhǎng)較好，產(chǎn)物合成穩(wěn)定。確定的下游產(chǎn)物提取、分離方法為：菌絲體冷凍4h，組織搗碎機(jī)破碎20s，用3倍量的氯仿提取破碎的細(xì)胞液3次，每次10h；提取率明顯提高。 結(jié)論：得到用發(fā)酵法獲得鬼臼毒素類(lèi)物質(zhì)和從發(fā)酵產(chǎn)物中提取鬼臼類(lèi)物質(zhì)的技術(shù)路線，該研究具有實(shí)