茭白兩種內(nèi)生真菌分離純化及培養(yǎng)條件優(yōu)化.pdf

1、茭白（Zizania latifolia）為菰屬多年生草本植物，是我國第二大水生蔬菜。不僅營養(yǎng)豐富，同時具有保健和藥用價值。茭白膨大莖的形成與菰黑粉菌的侵染有密切關(guān)系，茭白有正常茭白、灰茭及雄茭三種表型，這三種表型與黑粉菌在茭白體內(nèi)的生長密切相關(guān)。當(dāng)黑粉菌成功侵染茭白植株后，茭白莖部組織膨大形成肥大的肉質(zhì)莖，即“正常茭”;如果植株能抵抗菰黑粉菌的侵染，從而開花結(jié)實(shí)，不長茭白的稱之為“雄茭”;若黑粉菌潛育期縮短，形成黑褐色的厚垣孢子堆，使

2、得茭白的肉質(zhì)莖中充滿黑色斑點(diǎn)的則稱之為“灰茭”。研究表明，茭白在生產(chǎn)上若連續(xù)兩年不選種，雄茭、灰茭的發(fā)生率將達(dá)到30％左右，嚴(yán)重影響農(nóng)民的經(jīng)濟(jì)效益。
　　本課題以茭白為研究對象，研究茭白內(nèi)生真菌的種類及其培養(yǎng)條件，主要如下:
　　(1)采用三點(diǎn)純化與單孢分離相結(jié)合的方法對茭白內(nèi)生真菌進(jìn)行分離純化，再通過分子生物學(xué)手段對其內(nèi)生真菌進(jìn)行菌絲DNA提取、真菌引物設(shè)計、目的片段PCR擴(kuò)增、目的片段膠回收、T載體連接及相應(yīng)質(zhì)粒提取等一

3、系列手段，對所得內(nèi)生真菌進(jìn)行鑒定。通過測序得到兩個內(nèi)生真菌長度為:627bp和618bp，測序結(jié)果表明，分離的兩種內(nèi)生真菌為毛霉菌和煙管菌。
　　(2)以茭白內(nèi)生真菌純化鑒定為前提，獲取毛霉菌純菌落，對純化后的茭白毛霉菌的培養(yǎng)條件包括培養(yǎng)基、接種量、pH值、轉(zhuǎn)速、溫度、時間進(jìn)行系統(tǒng)篩選，得出茭白毛霉菌在接種量為3/50ml，pH為6.5，轉(zhuǎn)速為130r/min，溫度為28℃的改良馬丁培養(yǎng)基中生長良好，且生長到108h時達(dá)到最佳水平