兩種植物多糖的分離純化及活性研究.pdf

1、本課題組通過文獻(xiàn)調(diào)研和預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)番石榴多糖具有抗2型糖尿病活性，啤酒花多糖具有抗骨質(zhì)疏松作用，本論文擬開展以下兩方面工作：
　?。?）番石榴多糖對2型糖尿病大鼠的藥效評價(jià)及作用機(jī)制研究；
　?。?）具有抗骨質(zhì)疏松作用的啤酒花多糖的結(jié)構(gòu)研究。
　　取番石榴果實(shí)，利用熱水/堿水提取，梯度醇沉，sevag法脫蛋白，去離子水透析、凍干得番石榴多糖部位GP-1、GP-2、GP-3、GP-4，對四個(gè)番石榴多糖部位進(jìn)行體內(nèi)抗2型糖尿

2、病藥效評價(jià)。采用高脂高糖飲食聯(lián)合小劑量STZ注射，成功誘導(dǎo)了高糖、肥胖的2型糖尿病大鼠模型。番石榴多糖給藥5周后，測試大鼠空腹血糖、口服糖耐量、糖化血清蛋白、胰島素水平、胰島素敏感指數(shù)、胰島素抵抗指數(shù)、血漿C肽、游離脂肪酸、甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、胰島病理切片、氧化應(yīng)激通路、胰島信號通路蛋白表達(dá)等指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)番石榴多糖部位GP-1、GP-3和GP-4可以顯著降低糖尿病大鼠的空腹血糖，且能在較長時(shí)間內(nèi)有效控

3、制大鼠血糖水平。胰島素相關(guān)指標(biāo)顯示，三個(gè)多糖部位可以顯著降低糖尿病大鼠的INS、C肽、HOMA-IR，提高了大鼠胰島素敏感度，緩解胰島素抵抗。血脂水平與胰島素抵抗密切相關(guān)，上述三個(gè)多糖部位能夠有效降低大鼠FFA、TC、TG水平，說明其發(fā)揮作用可能是通過一、減少脂質(zhì)分解，降低FFA水平，促進(jìn)葡萄糖氧化和糖酵解，加強(qiáng)肝臟等組織對葡萄糖的攝取和利用，以達(dá)到降低血糖的效果；二、降低胰島素受體底物IRS的磷酸化作用，增強(qiáng)胰島素通路PI3K等因子的

4、表達(dá)，調(diào)節(jié)糖代謝；三、降低FFA水平，抑制β細(xì)胞的不良增生和凋亡，降低胰島素的分泌。血脂檢測結(jié)果與信號通路中INSR、IRS-2、PI3K、Akt、Glut4的上調(diào)表達(dá)結(jié)果一致。氧化應(yīng)激結(jié)果表明，三個(gè)番石榴多糖部位能夠顯著提高糖尿病大鼠體內(nèi)抗氧化能力，緩解肝臟和胰島細(xì)胞損傷，這與樣品顯著降低肝功能指標(biāo)ALT、AST，顯著改善病理切片中胰島細(xì)胞形態(tài)與數(shù)量等結(jié)果一致。以上結(jié)果均表明番石榴多糖GP-1、GP-3、GP-4對2型糖尿病大鼠具有顯

5、著的治療作用，其發(fā)揮作用可能是在氧化應(yīng)激和PI3K/Akt胰島信號通路的協(xié)同下完成的。
　　取啤酒花藥材，利用熱水/堿水提取，梯度醇沉，sevag法脫蛋白，去離子水透析、凍干得啤酒花多糖HLP50、HLP70、HLP90、HLPB。利用離子交換和分子篩柱層析對啤酒花多糖進(jìn)行分離純化，通過HPGPC、IR、UV、NMR、SEM、AFM、CD結(jié)合一系列化學(xué)方法對啤酒花均一多糖進(jìn)行一級、高級結(jié)構(gòu)研究。苯酚-硫酸法檢測HLP50、HLP7

6、0、HLP90、HLPB四個(gè)部位的糖含量分別為：70.4％、64.31%、58.71%、35.2%。利用DEAE-52、Sephacry S-100對HLP90、HLPB進(jìn)行分離純化，得到HL70-2和HL90-1兩個(gè)多糖。經(jīng)HPGPC檢測，均為均一多糖，分子量分別為6505 Da和2344 Da。通過單糖組成分析、紅外檢測、甲基化(GC-MS)，核磁共振等綜合分析，得出HL70-2由(→1)連接的Glc、(1→3)、(1→2,3,5)