馬齒莧多糖的分離純化及活性研究.pdf

1、馬齒莧(Portulaca oleraceaL.)是我國(guó)古老的藥食兼用植物。近年來(lái)，馬齒莧以其豐富的營(yíng)養(yǎng)、獨(dú)特的藥理作用以及藥食兼用的特性，日益受到廣泛的關(guān)注。研究表明，馬齒莧具有調(diào)血脂、抗動(dòng)脈硬化、抗腫瘤、抗衰老、降血糖等多種藥理活性。多糖作為一種重要的生命物質(zhì)，具有多種生物活性，特別是抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)作用受到廣泛關(guān)注。本論文以馬齒莧為原料，研究馬齒莧多糖的提取、分離純化及其體內(nèi)免疫活性、體外抑瘤作用和抗氧化活性，為功能食品和藥品的研

2、究開發(fā)提供基礎(chǔ)，為馬齒莧的開發(fā)利用提供新途徑。
　　 本論文的主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：
　　 1、研究了馬齒莧粗多糖的水提法優(yōu)化工藝。采用苯酚-硫酸法測(cè)定多糖含量，以多糖提取率為考察指標(biāo)，進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，考察固液比、溫度、時(shí)間、提取次數(shù)等因素對(duì)提取率的影響。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)行正交試驗(yàn)，優(yōu)化水提法工藝條件。水提法優(yōu)化工藝條件為溫度100℃、時(shí)間2h、固液比1:15、提取次數(shù)4次，此條件下多糖提取率達(dá)94.26％，粗多糖得率為

3、15.50％，多糖含量為22.60％。
　　 2、研究了馬齒莧多糖的分離純化工藝，測(cè)定了多糖組分的分子量，分析了其單糖組成。
　　 (1)比較分析了大孔樹脂吸附法、H2O2法以及活性炭吸附法三種脫色方法對(duì)馬齒莧水提液的脫色效果，結(jié)果表明大孔吸附樹脂AB-8的效果較好。
　　 (2)對(duì)脫色后的馬齒莧多糖溶液進(jìn)行脫蛋白試驗(yàn)研究，比較了三氯乙酸法、sevag法、三氯乙酸-正丁醇法三種方法脫蛋白的效果，結(jié)果表明三氯乙酸法

4、效果最好。
　　 (3)采用DEAE-52纖維素，對(duì)脫色脫蛋白后的馬齒莧多糖進(jìn)行純化，得到POPS0、POPS1、POPS2、POPS3和POPS4五個(gè)多糖組分，純度分別為84.31％、92.14％、90.45％、88.47％和82.16％，高效液相色譜法（HPLC）測(cè)得其分子量分別為1.801×104D、5.583×104D、2.721×105D、6.006×105D和9.443×105D。用氣相色譜法測(cè)定多糖的單糖組成，結(jié)果

5、表明：多糖POPS0中含有單糖葡萄糖和半乳糖，其摩爾比為1.76:1；多糖POPS1中含有鼠李糖、葡萄糖和半乳糖，其摩爾比為1.61:1.12:1.4；多糖POPS2中含有阿拉伯糖、木糖、甘露糖和半乳糖，其摩爾比為1.34:1.84:1.52:0.15；多糖POPS3中含有木糖、葡萄糖和半乳糖，其摩爾比為1.62:1.22:1.48；多糖POPS4中含有阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖，其摩爾比為1.22:0.67:0.41。
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6、、研究馬齒莧粗多糖(POP)的體內(nèi)免疫活性。結(jié)果表明：馬齒莧未脫蛋白粗多糖(POP-1)在劑量100mg/kg下，能明顯增強(qiáng)免疫抑制小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能(p＜0.01)；在300mg/kg下，能顯著提高免疫抑制小鼠的血清溶血素水平(p＜0.001)；在100mg/kg、300mg/kg下，能增加免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)(P＜0.05)。馬齒莧脫蛋白粗多糖POP-2在劑量300mg/kg下，能增強(qiáng)免疫抑制小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能

7、(p＜0.05)；在300mg/kg下，能顯著提高免疫抑制小鼠的血清溶血素水平(p＜0.001)；在100mg/kg、300mg/kg下，能明顯增加免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)（P＜0.01或p＜0.001）。
　　 4、采用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT法)測(cè)定馬齒莧粗多糖POP和純化后多糖組分POPS1、POPS2、POPS3、POPS4對(duì)人胃癌腫瘤細(xì)胞株SGC、人辟癌腫瘤細(xì)胞株AGS和血癌腫瘤細(xì)胞株U937的生長(zhǎng)抑制率。

8、結(jié)果表明，各多糖對(duì)腫瘤細(xì)胞都有一定的抑制作用。POPS1對(duì)SGC的抑制作用最強(qiáng)，濃度為160μg/mL時(shí)，抑制率為49.27％；POPS2對(duì)AGS的抑制作用最好，濃度為320μg/mL時(shí)，抑制率為26.33％；POPS3對(duì)U937的抑制效果最明顯，濃度為640μg/mL時(shí)，抑制率為66.74％。
　　 5、采用水楊酸法和DPPH法研究馬齒莧多糖的體外抗氧化活性。結(jié)果顯示粗多糖以及純化后多糖都有抗氧化活性。馬齒莧多糖POPS2對(duì)羥