馬齒莧酚性成分的分離及馬齒莧酰胺E的藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、本研究利用各種柱色譜方法(包括正相硅膠柱、Sephadex LH-20凝膠柱、MCI色譜柱以及半制備型HPLC)對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分段、純化，利用碳譜(13C NMR)、氫譜(1H NMR)、二維譜HSQC、HMBC和高分辨質(zhì)譜(HR-ESI-MS)數(shù)據(jù)鑒定結(jié)構(gòu)，從馬齒莧60％乙醇提取液經(jīng)聚酰胺柱色譜洗脫的多酚部位分離鑒定了12個(gè)化合物:香草醛（香蘭素，vanillin，1）、對(duì)羥基苯甲醛(4-羥基苯甲醛，p-hydroxybenzaldehy

2、de，2)、原兒茶醛（3，4-二羥基苯甲醛protocatechualdehyde，3）、對(duì)羥基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid，4)、阿魏酸(3-甲氧基-4-羥基肉桂酸，ferulicacid，5)、對(duì)羥基苯乙酸甲酯(methyl4-hydroxyphenylacetate，6)、異香蘭酸(3-羥基-4-甲氧基苯甲酸，isovanillic acid,7)、咖啡酸（3，4-二羥基肉桂酸，caffeic acid，8）

3、、反式對(duì)羥基肉桂酸（3-（4-羥基苯基）-2-丙烯酸，trans-p-hydroxycinnamic acid,9）、iseluxine(10)、馬齒莧酮(portulacatone，11)與馬齒莧酰胺E(oleraceinE，簡(jiǎn)稱OE，12)。11是一個(gè)新酚性生物堿，1、2、3、6、10這五個(gè)化合物是第一次從馬齒莧分到。馬齒莧酮(portulacatone，11)和iseluxine(10)清除DPPH自由基能力隨著化合物濃度增加而升

4、高，其EC50值分別為14.63μM和9.98μM，強(qiáng)于天然抗氧化劑VC(EC50=20.72μM)。
　　馬齒莧酰胺E(OE)的理化性質(zhì)研究:(1)建立了溶液中OE的HPLC-UV檢測(cè)方法:色譜柱[Inertsil ODS-3(4.6×250 mm，5μm)]，保護(hù)柱(4.0×3.0 mm，5μm);流動(dòng)相為甲醇-0.1％甲酸(32∶68)，流速f=1 mL/min，波長(zhǎng)λ=287 nm，柱溫T=30℃。(2)測(cè)定了OE在幾種常

5、見(jiàn)的溶劑、不同pH磷酸鹽緩沖液中37℃時(shí)的平衡溶解度，結(jié)果表明，OE在不同溶劑中的平衡溶解度從低至高依次為石油醚（不溶）、氯仿(36.9976μg/mL)、乙酸乙酯(132.4791μg/mL)、正辛醇(410.2657μg/mL)、水(525.0000μg/mL)、乙腈(632.0947μg/mL)、正丁醇(1337.3675μg/mL)、乙醇(2573.9049μg/mL)、甲醇(5125.1133μg/mL)。在pH2、4、5.8

6、緩沖液中的平衡溶解度分別為487.3359μg/mL、472.0468μg/mL、483.9740μg/mL。(3)測(cè)定了OE在不同pH(2/4/6.8/7.4/8)磷酸鹽緩沖液中和不同溫度(25℃，37℃，50℃)條件下的穩(wěn)定性。據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出結(jié)論:OE在pH2、4緩沖液里9h內(nèi)穩(wěn)定;在pH6.8/7.4/8（中性、堿性磷酸鹽緩沖液）里，OE逐漸降解，并且溫度、pH升高，降解速度變大。(4)油水分配系數(shù)測(cè)定結(jié)果顯示，OE在正辛醇/水和

7、正辛醇/pH2/4/5.8/6.8磷酸鹽緩沖液的油水分配系的對(duì)數(shù)logP分別為0.520、0.552、0.575、0.567、0.597。
　　OE的藥代動(dòng)力學(xué)研究:(1)建立了血漿中OE的HPLC-UV檢測(cè)方法:TSKgelODS-3色譜柱(4.6×250 mm，5μm)，保護(hù)柱(4.0×3.0 mm，5μm)，柱溫T=35℃，甲醇-0.1％甲酸(28∶72)為流動(dòng)相，流速0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為287 nm;進(jìn)行了專屬

8、性、線性、回收率、精密度、穩(wěn)定性、LOD、LOQ幾項(xiàng)方法學(xué)考察。(2)測(cè)定了Wistar雄性大鼠灌胃和尾靜脈給藥OE后的藥時(shí)曲線，通過(guò)DAS1.0軟件非房室模型分析得到了各自的統(tǒng)計(jì)矩參數(shù)。灌胃給OE（10.5 mg/kg體重）的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù): AUC(0-∞)=14.91±6.11μg/mL*min，Cmax=0.31±0.11μg/mL，Tmax=15min，t1/2z=23.90±9.86 min;尾靜脈注射給OE(6.4 mg/