熒光假單胞菌毒蛋白的分離純化與松材線蟲的無異培養(yǎng).pdf

1、該研究對松材線蟲攜帶的致病細菌熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)GcM5-1A菌株產(chǎn)生的毒素蛋白進行了分離、純化及對分離后蛋白組分的生物活性進行了測定;同時,對松材線蟲的無異培養(yǎng)進行了研究,主要的研究結果如下:1.熒光假單胞菌GcM5-1A毒素原液經(jīng)(NH<,4>)<,2>SO<,4>分級鹽析及生物活性測定后得到毒性最強的組分;該組分先后依次經(jīng)葡萄糖Sephadex G-100凝膠層析柱、DEAESephad

2、exA-50陰離子交換柱及SP Sephadex C-50陽離子柱分離及對分離后各組分生物活性測定,得到其中毒性最強組分的純化蛋白;對純化蛋白進行SDS-PAGE電泳,得該純化蛋白的大致分子量為45000.2.黑松愈傷組織對無菌松材線蟲產(chǎn)卵量的影響的研究結果表明:無論是經(jīng)冷凍處理失活的黑松愈傷組織還是活黑松愈傷組織,兩者都能明顯地促進松材線蟲的產(chǎn)卵;黑松愈傷組織是否失活對松材線蟲產(chǎn)卵量沒有顯著影響.3.熒光假單胞菌GcM5-1A菌株對松

3、材線蟲產(chǎn)卵量的影響的研究結果表明:用經(jīng)三氯甲烷處理后的死熒光假單胞菌GcM5-1A與活熒光假單胞菌GcM5-1A都對松材線蟲的產(chǎn)卵量有顯著的促進作用;熒光假單胞菌GcM5-1A是否死亡對松材線蟲的產(chǎn)卵量沒有顯著影響.4.研究表明:用死熒光假單胞菌加死黑松愈傷組織培養(yǎng)的無菌松材線蟲的產(chǎn)卵量與用活黑松愈傷組織培養(yǎng)的野生松材線蟲的產(chǎn)卵量之間沒有差異,而用前者培養(yǎng)的無菌松材線蟲的產(chǎn)卵量卻顯著多于單獨用死黑松愈傷組織培養(yǎng)的無菌松材線蟲的產(chǎn)卵量,說

4、明用死熒光假單胞菌加死黑松愈傷組織比單獨用黑松愈傷組織培養(yǎng)無菌松材線蟲能促進松材線蟲的繁殖.5.對分別用活黑松愈傷組織、死熒光假單胞菌、活熒光假單胞菌以及死熒光假單胞菌加死黑松愈傷組織四種介質(zhì)培養(yǎng)的第一代和第二代無菌松材線蟲雌雄成蟲體長、體直徑及體積進行觀察測定,結果表明,無論是第一代還是第二代,用死熒光假單胞菌加死愈傷組織培養(yǎng)的無菌松材線蟲雌雄成蟲的體長、體直徑和體積都明顯大于用其它三種介質(zhì)培養(yǎng)的松材線蟲雌雄成蟲的體長、體直徑和體積,

5、說明與其它三種介質(zhì)相比,死熒光假單胞菌加死黑松愈傷組織能明顯促進無菌松材線蟲的生長發(fā)育.綜上所述,該研究首次對松材線蟲攜帶的致病細菌熒光假單胞菌(Pseudomonasfluorescents)GcM5-1A菌株產(chǎn)生的毒素蛋白進行分離、純化及生物活性測定,得到了毒性最強的純化蛋白;經(jīng)測定其分子量約為45000.該研究首次報道了用死熒光假單胞菌加死黑松愈傷組織培養(yǎng)無菌松材線蟲的新方法;該方法比單獨用黑松愈傷組織培養(yǎng)無菌松材線蟲在線蟲產(chǎn)卵量