松材線蟲攜帶的熒光假單胞菌GcM5-1A過氧化物酶的研究.pdf

1、松材線蟲病(Pine wilt disease，PWD)主要通過松褐天牛為宿主傳播，是由松褐天牛攜帶的松材線蟲(Bursaphelenchus xyluphilus)引起的一種松樹毀滅性傳染疾病。PwD可以對多種松屬的植物造成危害。由于松材線蟲病的發(fā)生和發(fā)展過程中涉及到松樹寄主、媒介昆蟲、松材線蟲、相關(guān)的微生物以及環(huán)境條件等多種因素，而這些因素之間構(gòu)成了復(fù)雜的關(guān)系，所以給該病的致病機理研究以及防治工作造成了難度。本實驗研究了松材線蟲攜帶

2、的熒光假單胞菌GcM5-1A的培養(yǎng)液經(jīng)硫酸銨分級沉淀后各組分中木質(zhì)素過氧化物酶(LiP)的活性及各組分對黑松懸浮細(xì)胞的毒性。本文還對GcM5-1A菌株胞外LiP進行了初步純化，并對純化后的酶學(xué)性質(zhì)進行了研究。結(jié)果表明：LiP活性主要出現(xiàn)在50％-70％沉淀組分中；除了0-20％沉淀組分，50-70％沉淀組分對黑松懸浮細(xì)胞的毒性也很強。GcMS-IA菌株培養(yǎng)液經(jīng)硫酸銨分級沉淀以及DEAE-Sepharose FF兩步純化后，其LiP的比活

3、力從0.81U/mg提高到21.30 U/mg。其最適溫度為35℃，最適pH為4.0。在15-35℃、pH6.0-9.O范圍內(nèi)，酶活保持相對穩(wěn)定。NH20H.HC1和KCN對酶活的抑制作用分別達(dá)到88％和57％，而NaN3對酶活的抑制作用只有15％左右。吸收光譜顯示該酶在406 nm處有一個Soret峰，加入1mmol/L Na2S204后，吸光度出現(xiàn)了明顯的下降，但Sorer峰沒有顯著移動。
　　 另外，我們構(gòu)建了熒光假單胞菌

4、GcM5-1A菌株的基因組文庫，并且通過生物活性測定的方法從文庫中篩選出一個產(chǎn)毒素的轉(zhuǎn)化子。我們對核苷酸序列進行了測定，結(jié)果表明該序列含一個1290 bp的開放讀框。信號分析軟件推測N末端有一個36個氨基酸的信號肽。同源性分析顯示，毒素基因的核苷酸序列與P.f1uorescensSBW25的PFLU2919基因，P.fluorescens Pf-5的Dyp類型過氧化物酶家族基因以及P.fluorescens PfO-1的Tat轉(zhuǎn)移酶分別