松材線蟲枯萎病疫木上的藍變菌研究.pdf

1、本文從浙江寧海及云南紫溪山采集感染松材線蟲的馬尾松藍變木材和感染擬松材線蟲的云南松藍變木材，針對松枯萎病疫木上的藍變菌進行研究，研究其分類學(xué)、致病性，在主要對前兩種松樹分離的同時，分離了在大興安嶺采集的偃松樣品。3種樣品通過用培養(yǎng)基分離與木塊保濕分離2種方法從馬尾松、云南松、偃松木材中分離純化出679株真菌，經(jīng)變色實驗篩選出21株藍變菌，通過形態(tài)及分子方法鑒定，確定此21株藍變菌菌株屬7屬11種藍變菌，包括Leptographium a

2、bietinum、Ophiostomaaenigmaticum、Leptographium aenigmaticum、Botryosphaeria obtusa、Pleosporaceaesp.1、 Phomopsis sp.1、 Phomopsis sp.2、Pleosporaceae sp.2、Pleosporaceae sp.3、Botryodiplodia sp.、Sphaeropsis sp.。其中 L.abietinum、O

3、.aenigmatinum、L.aenigmaticum通過形態(tài)鑒定確定為中國新紀(jì)錄種。
　　將從3種松樹中所分離得到的藍變菌菌株進行致病性測定，測試方法采用生測法，用培養(yǎng)3個月的木質(zhì)化的馬尾松苗木浸漬在搖培30d的藍變菌過濾菌液中，每隔12h觀察一次苗木變化情況，結(jié)果表明，L.abietinum致病性最強，5d可使馬尾松苗木整株枯萎，其次是O.aenigmatinum、L.aenigmatinum，其它菌株對馬尾松苗木也存在不同

4、程度的致病性，而B.obtusa、Pleosporaceae sp.2、Phomopsis sp.2、Pleosporaceae sp.3幾乎無致病性，在30d內(nèi)馬尾松苗木與對照相比幾乎無變化。
　　針對致病性最強的菌株L.abietinum研究其生物學(xué)特性及致病機理。生物學(xué)特性結(jié)果表明，在PDA培養(yǎng)基上，菌絲生長最適條件，溫度為25℃，黑暗，pH為5.9，最適碳源為蔗糖，最適氮源為硝酸鉀;最適產(chǎn)孢條件，溫度為25℃，黑暗，pH為

5、7.0，最適碳源為蔗糖，最適氮源為尿素。在生物學(xué)特性研究結(jié)果的基礎(chǔ)上進行致病機理測定。以Czapek's瓊脂為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，將氮源硝酸鉀替換為尿素，接入L.abietinum菌種，搖培30d后，過濾培養(yǎng)液，對過濾液進行熱穩(wěn)定性測定，同時用茚三酮、FeCI3、CaCI23種試劑測定過濾液中主要致病物質(zhì)，結(jié)果表明過濾液具有熱不穩(wěn)定性，其中含有蛋白質(zhì)類物質(zhì)和糖蛋白，進一步確定實驗證明L.abietinum可以產(chǎn)生毒素，其毒素中的致病物質(zhì)為蛋白質(zhì)