西唐氏鏈霉菌Z-L-22活性物質(zhì)的分離提純及理化性質(zhì)初探.pdf

1、番茄潰瘍病(Bacteria Canker of Tomato)是由密執(zhí)安棒桿菌密執(zhí)安亞種(Clavibacter michiganensis subp．michiganensis，Cmm)引起的一種重要的細菌病害，每年造成嚴重的經(jīng)濟損失，目前還沒有安全有效的防治措施。本實驗室從番茄植株根際土中篩選出一株對番茄潰瘍病菌有強烈頡頏作用的鏈霉菌，通過生物學鑒定和分子檢測把其確定為西唐氏鏈霉菌(S．setonii)。本實驗主要從西唐氏鏈霉菌Z

2、-L-22發(fā)酵抑菌活性物質(zhì)的穩(wěn)定性、理化性質(zhì)、分離提純方法等幾個方面進行研究。 在分離提純之前，首先對其進行預處理，結果表明經(jīng)過草酸處理的發(fā)酵抑菌活性物質(zhì)會有少量損失，但能提高發(fā)酵液萃取分離效率。用HCl和NaOH調(diào)無菌發(fā)酵上清液的pH值，并在室溫處理24h，60℃、90℃溫度條件下處理1h，結果表明抑菌活性物質(zhì)的在強酸和中性條件下比較穩(wěn)定，強堿條件下穩(wěn)定性降低，并且溫度升高會使其在酸堿中的穩(wěn)定性降低；經(jīng)過不同的溫度處理，120

3、℃處理12h其抑菌圈直徑依然能達到21.4mm，說明該活性物質(zhì)的高溫穩(wěn)定性比較高；抑菌活性物質(zhì)的紫外線和日光穩(wěn)定性實驗表明它對紫外線和日光有較強的穩(wěn)定性。 用捷克八溶劑系統(tǒng)紙層析和pH紙層析法對西唐氏鏈霉菌Z-L-22的抑菌活性物質(zhì)進行分析，發(fā)現(xiàn)活性物質(zhì)在捷克八溶劑系統(tǒng)中的Rf值都在0.9以上，與經(jīng)典的抗生素素色譜圖對比發(fā)現(xiàn)其與大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的色譜圖類似；在不同的pH條件下抑菌活性物質(zhì)紙層析的Rf值相近，都接近溶劑前沿，這與中

4、性抗生素的pH紙層析的色譜圖相似，綜上所述把西唐氏鏈霉菌Z-L-22的發(fā)酵活性物質(zhì)初步確定為中性的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。 用不同的展開劑對發(fā)酵粗提物進行TLC分析，發(fā)現(xiàn)苯：乙酸乙酯：甲醇=19：19：4為最佳展開劑，能把發(fā)酵粗提物分為8個組分，通過TLC制備各個組分并對其進行抑菌生物活性測定，發(fā)現(xiàn)其中的四個具有抑菌生物活性，為別為Ⅰ(Rf=0.96)、Ⅱ(Rf=0.64)、Ⅲ(Rf=0.56)、Ⅳ(Rf=0.5)。對乙酸乙酯發(fā)酵液萃

5、取和丙酮菌絲浸提粗提物進行HPLC分析，發(fā)現(xiàn)兩者的組分相同，只是組分的含量不同。TLC分離的組分Ⅱ的純度為85.58％，組分Ⅲ的純度為78.65％。用非極性大孔吸附樹脂吸附發(fā)酵粗提物中的活性物質(zhì)，用40％、70％、90％的乙醇進行梯度洗脫，梯度洗脫組分的HPLC分析表明70％乙醇洗脫得到一個純度為50.05％的活性組分，90％洗脫得到一個純度為66.08％的活性組分。最后用半制備HPLC對發(fā)酵粗提物進行分離提純，得到純度在組分97％以上