化纖湯對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺損傷干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：肺間質(zhì)纖維化是一組早期有肺泡細(xì)胞損傷和各種炎性細(xì)胞浸潤，繼后出現(xiàn)膠原纖維沉積，并逐漸演變了彌漫性肺間質(zhì)纖維化的疾病群。活動(dòng)性呼吸困難、X線胸片彌漫陰影、限制性通氣障礙、彌散功能降低和低氧血癥乃至后期的呼吸衰竭為其臨床特點(diǎn)。由于目前該病發(fā)病率逐年增加，但發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，又缺乏有效的治療藥物，故尋找行之有效的防治藥物是目前醫(yī)療界迫切需要解決的問題。因此探討中醫(yī)中藥防治該病具有廣闊前景和深遠(yuǎn)的意義。本課題觀察具有益氣通陽、行氣活血

2、化痰功能的化纖湯對(duì)博萊霉素肺纖維化大鼠療效，并從其對(duì)血清部分細(xì)胞因子、肺組織氧自由基、肺組織TGFβl表達(dá)以及線粒體膜流動(dòng)性等方面的影響，探求其作用機(jī)制。 方法：健康144只Wistar大鼠，體重180-240g，隨機(jī)分為六組：正常對(duì)照組(A)、模型組(B)、強(qiáng)的松組(C)、中藥大劑量組(D)、中劑量組(E)和小劑量組(F)，每組24只。采用氣管內(nèi)滴注博萊霉素造模法造模，各組均于造模后第2天開始灌胃給藥。正常對(duì)照組與模型組每日一

3、次灌胃生理鹽水10ml/kg·bw，強(qiáng)的松組大鼠給予醋酸強(qiáng)的松混懸液，給藥劑量為10ml/kg·bw，中藥各劑量組分別給予相應(yīng)濃度中藥10ml/kg·bw每日灌胃一次(強(qiáng)的松與中藥用量相當(dāng)于成人常用量，按照體表面積折算)。各組動(dòng)物分別于7d、14d、28d隨機(jī)處死8只。①通過觀察(HE染色光鏡觀察和透射電鏡觀察)化纖湯對(duì)博萊霉素肺纖維化模型病理形態(tài)學(xué)的影響，從而對(duì)其治療作用進(jìn)行客觀評(píng)價(jià)，并從中重點(diǎn)了解Ⅱ型肺泡細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)改變；②分別采

4、用TBA法和比色法測定肺組織勻漿液MDA及GSH含量，觀察化纖湯對(duì)肺組織部分氧自由基含量的影響，探討其對(duì)肺纖維化模型肺組織的保護(hù)機(jī)制；③用ELISA方法檢測血清TGFβ1及Th2型細(xì)胞因子IL-4水平，觀察化纖湯對(duì)以上損傷性細(xì)胞因子的影響，探討其對(duì)肺纖維化發(fā)生和進(jìn)程的作用機(jī)制；④TGFβ1是肺纖維化形成的關(guān)鍵細(xì)胞因子，采用RT-PCR法檢測肺纖維化大鼠肺組織TGFβ1各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)的影響，觀察化纖湯對(duì)其的影響，明確化纖湯治療肺纖維化的部分

5、作用途徑；⑤分別用Rhl23和PI染色肺組織細(xì)胞懸液，流式細(xì)胞儀檢測大鼠肺組織中線粒體膜流動(dòng)性，觀察化纖湯對(duì)各時(shí)間點(diǎn)肺組織中細(xì)胞線粒體膜完整性的影響，探求其治療肺纖維化的另一作用途徑(該實(shí)驗(yàn)治療組僅選擇中藥中劑量組)。 結(jié)果：①大鼠博萊霉素肺纖維化模型病理形態(tài)學(xué)改變：第7天肺泡間隔增厚，伴有炎性細(xì)胞浸潤，間質(zhì)內(nèi)成纖維細(xì)胞增多，病灶內(nèi)肺泡萎縮，肺泡內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤；14d肺泡間隔明顯增寬，成纖維細(xì)胞和膠原基質(zhì)明顯增多；28d肺泡

6、結(jié)構(gòu)破壞，肺泡壁顯著增厚，肺間質(zhì)纖維化瘢痕形成，毛細(xì)血管腔閉塞；超微病理示第7d、14d，Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞增生、腫脹，線粒體腫脹，嵴縮短、斷裂或消失，甚至空泡樣變性，板層小體數(shù)量增多，但是多呈空泡樣，細(xì)胞微絨毛破壞、稀少或消失；28d，Ⅱ型細(xì)胞數(shù)量較7d、14d減少，細(xì)胞內(nèi)線粒體嵴斷裂或消失，大多呈空泡樣變性，數(shù)量明顯減少，板層小體量也減少，大多呈空泡樣變；②上述病理改變，第7d，D組改善最明顯，其次為C、E、F組；第14d，D組改善最

7、明顯，其次為E、C、F組；第28d，D組改善最明顯，其次為E、F、C組，其中第7d、28d肺泡炎、肺纖維化Szapiel分級(jí)比較具有顯著性差異(P＜0.01or0.05)；③與B組相比，C、D、E、F組各時(shí)間點(diǎn)MDA含量降低(P＜0.01，0.05or＞0.05)，GSH含量增高(P＜0.01，0.05or＞0.05)；C、D、E、F組間比較，第7d與第14d，MDA含量依次為F組＞C組＞E組＞D組，第28d依次為C組＞F組＞E組＞D組

8、(P＜0.01or0.05)；GSH含量順序在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相反((P＜0.01or0.05)；④與B組相比，C、D、E、F組各時(shí)間點(diǎn)血清TGFβ1、IL-4含量均降低(P＜0.01，0.05or＞0.05)，在第7d與第14d，TGFβ1、IL-4的高低順序?yàn)椋篎組＞C組＞E組＞D組(P＜0.01or0.05)；第28d依次為C組＞F組＞E組＞D組，但差異無顯著性(P＞0.05)；⑤與B組相比，C、D、E、F組各時(shí)間點(diǎn)TGFβ1表達(dá)降低；

9、C、D、E、F組間比較，第7d與14d的TGFβ1表達(dá)由低到高順序?yàn)镈、E、C、F(P＜0.01or0.05)，第28d的TGFβ1表達(dá)由低到高順序?yàn)镈、E、F、C差異無顯著性(P＞0.05)；⑥各時(shí)間點(diǎn)，細(xì)胞線粒體膜完整程度由高到低的順序均為正常組、化纖湯組、強(qiáng)的松組、模型組(P＜0.01or0.05，or＞0.05)。 結(jié)論：①通過博萊霉素氣管內(nèi)滴注造模所得大鼠肺纖維化模型病理形態(tài)改變?cè)诟鲿r(shí)間點(diǎn)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，說明造模成功；

10、②化纖湯對(duì)肺纖維化發(fā)展各個(gè)階段肺組織病理形態(tài)改變有顯著的改善作用，說明該方對(duì)肺纖維化有一定防治作用；③模型大鼠肺組織勻漿液中氧自由基MDA含量增高，有毒氧化物的有效清除劑GSH含量降低，化纖湯能夠降低肺組織勻漿液MDA含量，提高GSH含量，對(duì)博菜霉素致大鼠自由基所致的肺損傷具有一定保護(hù)作用；④模型大鼠血清TGFβ1、Th2型細(xì)胞因子IL-4水平增高，化纖湯能夠降低實(shí)驗(yàn)性肺纖維化血清TGFβ1、IL-4水平，對(duì)肺纖維化大鼠的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失