肺纖方對博萊霉素致大鼠肺間質(zhì)纖維化的實驗研究.pdf

1、本實驗擬從宏觀和微觀角度觀察并分析博萊霉素致大鼠肺間質(zhì)纖維化模型的特點，并將其特點與肺間質(zhì)纖維化的中醫(yī)病機(jī)認(rèn)識相比較，同時結(jié)合模型的特點、對肺間質(zhì)纖維化的病機(jī)認(rèn)識、肺纖方治療后大鼠從宏觀到微觀的各種變化，研究肺纖方對博萊霉素致大鼠肺間質(zhì)纖維化的治療作用和肺纖方的作用機(jī)理，從而探討對肺間質(zhì)纖維化的中醫(yī)病機(jī)認(rèn)識和肺纖方治療肺間質(zhì)纖維化的實驗室依據(jù)。肺纖方是導(dǎo)師姜良鐸教授在多年的臨床實踐和理論研究基礎(chǔ)上總結(jié)出來的治療肺間質(zhì)纖維化的有效方劑，由

2、冬蟲夏草菌絲粉、生黃芪、紅景天、麻黃、銀杏、瓜蔞、水蛭、海蛤殼組成，該方針對肺間質(zhì)纖維化肺腎虧虛、腎不納氣、氣虛血瘀、痰瘀深伏凝結(jié)痹阻肺絡(luò)的病機(jī)而設(shè)，具有補(bǔ)益肺腎、益氣活血、化瘀通絡(luò)、軟堅散結(jié)的作用。 采用氣管插管灌注博萊霉素的方法復(fù)制大鼠肺間質(zhì)纖維化模型，選用醋酸潑尼松龍作為陽性對照藥進(jìn)行本項研究。Wistar大鼠100只，隨機(jī)分入手術(shù)組85只，氣管插管灌注博萊霉素A5-生理鹽水1mg/kg體重，假手術(shù)組15只，灌注等體積生理

3、鹽水。手術(shù)組動物根據(jù)大鼠體重按照隨機(jī)數(shù)據(jù)表法隨機(jī)分入模型對照組29只、潑尼松對照組28只、肺纖方組28只，每組再隨機(jī)分入14、28、45三個時間點取材。觀測大鼠的整體狀況如精神、飲食、活動、皮毛、體重、死亡、及其它可能的臨床表現(xiàn)，肺組織大體和微觀的變化，研究這些變化與中醫(yī)病機(jī)認(rèn)識的關(guān)系。測定肺系數(shù)，光鏡觀察肺組織病理，進(jìn)行形態(tài)學(xué)半定量及定量分析，測定肺組織羥脯氨酸含量，以研究肺纖方對BLM致大鼠肺間質(zhì)纖維化的治療作用；測血清轉(zhuǎn)化生長因子

4、β1和血小板衍生生長因子進(jìn)行作用機(jī)制的初步探討。 通過對大鼠的日常觀察，發(fā)現(xiàn)肺纖方組整體狀況較好，在45天的實驗全程中沒有出現(xiàn)極度惡化的病例和死亡病例，而模型組死亡4例，潑尼松組死亡2例，但統(tǒng)計學(xué)顯示P＞0.05，考慮與樣本量太少和實驗設(shè)計非專為研究死亡率而設(shè)計有關(guān)；肺纖方組大鼠肺系數(shù)的減小速度比模型組和潑尼松組稍快，28天與14天肺系數(shù)比較顯著下降(P＜0.05)，而潑尼松組和模型組45天與14天比較顯著下降；肺組織病理結(jié)果顯

5、示肺纖方組纖維化程度有所減輕，肺間質(zhì)纖維化分級結(jié)果顯示45天肺纖方組比模型組輕，(P＜0.05)；Masson染色的膠原分析結(jié)果顯示45天時膠原染色的面密度和數(shù)密度顯著低于模型組和潑尼松組(P＜0.05)；肺纖方組肺組織羥脯氨酸含量第28天時低于模型組(P＜0.05)，45天時低于模型組和潑尼松組(P＜0.05)。血清轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)和血小板衍生生長因子(PDGF)檢測結(jié)果顯示，模型組大鼠兩種因子水平持續(xù)升高，在45天時

6、尤為顯著，高于假手術(shù)組(P＜0.05)。肺纖方組與潑尼松組對TGF-β1沒有明顯的降低作用(P＞0.05)，二者對TGF-β1影響基本一致；肺纖方組PDGF水平在14天時與其余各組比較顯著升高(P＜0.01)，但持續(xù)下降，至45天與假手術(shù)組接近(P＞0.05)，而模型組和潑尼松組PDGF水平皆隨時間延長逐漸上升，45天時均顯著高于假手術(shù)組(P＜0.01)。 通過本項研究初步得出如下結(jié)論：(1)博萊霉素致大鼠肺間質(zhì)纖維化的模型特點

7、與在臨床上對于肺間質(zhì)纖維化的病機(jī)認(rèn)識基本符合。 (2)肺纖方能改善BLM致肺間質(zhì)纖維化大鼠的整體狀況，其作用優(yōu)于潑尼松。 (3)肺纖方治療能在較短時間內(nèi)降低BLM致肺纖維化大鼠的肺系數(shù)，其作用優(yōu)于潑尼松。 (4)肺纖方有一定的逆轉(zhuǎn)BLM致大鼠肺間質(zhì)纖維化的作用，但對早期防止肺間質(zhì)纖維化的形成效果不明顯。表現(xiàn)在45天病理檢測肺間質(zhì)纖維化的程度減輕，羥脯氨酸含量下降。其作用優(yōu)于潑尼松。 (5)肺纖方和潑尼松對