中藥組方對(duì)博萊霉素致纖維化大鼠肺血管生成的影響.pdf

1、特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary flbrosis,IPF)是指特發(fā)性間質(zhì)性肺炎(idiopathic interstitial pneumonia,IIP)中病理表現(xiàn)為普通型間質(zhì)性肺炎的一種類型。病變局限于肺部，引起彌漫型肺臟改變，導(dǎo)致肺功能損害和呼吸困難。由于對(duì)該疾病的確切發(fā)病機(jī)制還沒有充分的認(rèn)識(shí)，因此對(duì)于其治療就顯得力不從心?？v觀目前現(xiàn)有的治療方法，多是從改善炎癥，調(diào)節(jié)免疫的角度出發(fā)的。而研究表明IPF不僅

2、僅存在炎癥和免疫失調(diào)，還存在著血管內(nèi)皮損傷后的異常修復(fù)，表現(xiàn)為血管異常生成和重構(gòu)。故單單依賴目前的治療手段很難達(dá)到理想的治療效果，因此尋求更為有效的治療方法顯得十分重要。 目的：本研究旨在探討IPF發(fā)生時(shí)，運(yùn)用中藥組方是否可以通過(guò)保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，下調(diào)促血管生成因子，減輕早期的異常血管生成，從而減緩肺纖維化的進(jìn)展和病情嚴(yán)重程度。 方法：清潔級(jí)、健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠(河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供

3、)54只，體重200～250g，適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后，隨機(jī)分三組，(1)生理鹽水組(H組)6只(2)模型組(M組)24只(3)中藥組(Z組)24只。M組和Z組按給藥后3，7，14，28天的時(shí)間點(diǎn)各自分成四個(gè)亞組，即M3、M7、M14、M28和Z3、Z7、Z14、Z28，均為6只大鼠。所有操作均在無(wú)菌條件下進(jìn)行。用10g/L水合氯醛(40mg/kg)腹腔注射麻醉，作頸正中切口，充分暴露氣管，經(jīng)環(huán)狀軟骨下氣管間隙穿刺向氣管內(nèi)緩慢注入藥液(H組按

4、5mL/Kg體重注入生理鹽水；M組和Z組按5mg/Kg體重抽取4mg/mL注入博萊霉素)。將大鼠直立并輕輕旋轉(zhuǎn)動(dòng)物，使藥液在肺內(nèi)分布充分、均勻。Z組于造模當(dāng)日給與中藥水煎液灌胃，每天一次。H組和M組喂以蒸餾水。根據(jù)時(shí)間點(diǎn)觀察每組大鼠肺的外觀變化，由心臟收集血液然后放血處死，測(cè)定血漿中ET-1和vWF的含量；取左肺葉，行HE染色及Masson染色，確定肺泡炎和肺纖維化的程度；免疫組化方法行CD31抗原染色，觀察血管生成情況；酶聯(lián)免疫吸附試

5、驗(yàn)(ELISA)法測(cè)定右肺組織勻漿的VEGF含量。于注入生理鹽水的第7天對(duì)H組大鼠做同樣的處理。采用SPSS 11.5版統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。 結(jié)果：1、血漿vWF含量(用A值來(lái)間接反映)：M、Z組的四個(gè)亞組分別與H組比較，差異有顯著性(p<0.05)，含量均高于H組。同一時(shí)間點(diǎn)，Z組含量低于M組(p<0.05)。 2、血漿ET-1含量(pg/mL)：M、Z組的四個(gè)亞組分別與H組比較，差異有顯著性(p<0.05)，含量均高于

6、H組，并隨病情發(fā)展持續(xù)升高。同一時(shí)間點(diǎn)，Z組含量介于M組和H組之間。Z3與M3相比差異無(wú)顯著性，但從樣本均數(shù)看，Z3(68.498)低于M3(69.130)。其他三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的Z組含量明顯低于M組(p<0.05)。 3、肺組織勻漿VEGF含量變化(ng/mgpr)：M、Z組的四個(gè)亞組分別與H組比較，差異有顯著性(p<0.05)，含量均高于H組，并隨病情發(fā)展持續(xù)升高。在3天和7天兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，Z組含量分別為11.753，14.226；

7、M組含量分別為12.982，16.553。上述兩組亞組相比差異無(wú)顯著性(p>0.05)。Z14、Z28含量分別明顯低于M14、M28(P<0.05)。 4、血管密度結(jié)果分析：M組于3、7、28天時(shí)與H組比較差異有顯著性(P<0.05)，14天時(shí)差異無(wú)顯著性(P>0.05)。Z組的四個(gè)亞組與H組比較差異有顯著性(P<0.05)。第3天和第28天時(shí)，Z組與M組比較差異無(wú)顯著性(P>0.05)，但從樣本均數(shù)分析，第3天Z組(9.271

8、7)異常血管生成情況要好于M組(9.3133)；第28天Z組(1.8533)血管缺失情況要好于M組(1.2700)，但差于H組(P<0.05)。 5、肺組織病理結(jié)果分析：對(duì)于肺泡炎：模型組、治療組與正常對(duì)照組相比差異有顯著性(P<0.05)。除第14天外，同一時(shí)間點(diǎn)治療組與模型組相比無(wú)顯著差異(P>0.05)，但是與M組相比，程度有所減輕。對(duì)于肺纖維化：僅在14、28天時(shí)，模型組、治療組與正常對(duì)照組比較差異有顯著性(P<0.0

9、5)。僅Z28組與M28組比較差異有顯著性(P<0.05)，而在其它時(shí)間點(diǎn)只是程度有所減輕。 結(jié)論：1、用博萊霉素致大鼠肺纖維化的動(dòng)物模型是成功的。2、在BLM致大鼠肺纖維化過(guò)程中，血漿vWF含量增加，提示存在血管內(nèi)皮的損傷。PF中血漿ET-1含量增加，肺組織勻漿中VEGF含量增加，新生血管密度早期增加，隨病情進(jìn)展血管密度逐漸減少，至纖維化嚴(yán)重時(shí)血管幾乎缺失。3、中藥組方減少損傷保護(hù)了血管內(nèi)皮，可以通過(guò)下調(diào)血漿ET-1含量及肺組