博萊霉素致肺纖維化大鼠體內(nèi)血小板活化狀態(tài)的研究.pdf

1、特發(fā)性肺纖維化(idiopathicpulmonaryfibrosis，IPF)是特發(fā)性間質(zhì)性肺炎(idiopathicinterstitialpneumonia，IIP)中最常見(jiàn)的類型，病理表現(xiàn)為普通型間質(zhì)性肺炎。其確切發(fā)病機(jī)制尚不清楚。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究表明肺內(nèi)凝血-纖溶活性的不平衡,影響了炎癥反應(yīng)及組織重構(gòu)，引起局部纖維蛋白沉積和成纖維細(xì)胞附著，導(dǎo)致了肺纖維化的發(fā)生，而在凝血過(guò)程中起重要作用的血小板未被提及。另有臨床報(bào)道肺纖維

2、化患者有發(fā)生肺血栓栓塞的傾向，但原因并不清楚，對(duì)于IPF肺內(nèi)微循環(huán)的研究也相對(duì)較少。 目的：氣管內(nèi)注入博萊霉素(BLM)建立肺纖維化大鼠模型。通過(guò)測(cè)定其支氣管肺泡灌洗液(BALF)和血漿中血小板活化標(biāo)志物血小板α顆粒膜蛋白(GMP-140)與血栓烷B2(TXB2)的水平，了解肺纖維化模型大鼠體內(nèi)是否存在血小板活化狀態(tài)，以及是否存在血栓前狀態(tài)，進(jìn)一步探討血小板活化與肺纖維化的關(guān)系。 方法：選取體重220±10g的清潔級(jí)雄性

3、SD大鼠48只，隨機(jī)分為對(duì)照組及博萊霉素組各24只。兩組動(dòng)物用水合氯醛(40mg/Kg)腹腔麻醉后，頸部正中切口暴露氣管，BLM組氣管內(nèi)注入0.2ml～0.3ml含BLMA5的生理鹽水溶液(5mg/Kg)，對(duì)照組注入等量的生理鹽水。兩組動(dòng)物于氣管注藥后第3天、7天、l4天、28天分別隨機(jī)心臟采血處死6只。取右肺固定于10％中性福爾馬林溶液中，常規(guī)病理切片，HE染色觀察肺內(nèi)炎癥，Masson染色觀察肺內(nèi)膠原，并進(jìn)行Szapiel病理分級(jí)，

4、觀察肺泡炎和和肺纖維化的動(dòng)態(tài)變化。用4℃無(wú)菌生理鹽水對(duì)左肺進(jìn)行肺泡灌洗，離心后取上清。用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)肺泡灌洗液和血漿中GMP-140、TXB2的濃度，檢測(cè)血小板活化狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及數(shù)據(jù)資料采用SAS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：(1)血漿和BALF中GMP-140濃度的變化：對(duì)照組血漿和BALF中GMP-140濃度各時(shí)間點(diǎn)均無(wú)顯著性差異(P分別為0.97，0.50)。BLM組血漿中GMP-140濃度于3

5、天時(shí)升高(16.11±0.88ng/ml，P＜0.01)、7天時(shí)達(dá)高峰(20.76±1.43ng/ml，P＜0.01)，14天、28天逐漸下降但仍高于正常對(duì)照組(分別為7.33±1.31ng/ml、5.86±1.57ng/m1)。BALF中GMP-140濃度各時(shí)間點(diǎn)均升高，分別為10.54±1.11ng/ml、14.41±0.67ng/ml、7.33±1.31ng/ml、5.86±1.57ng/ml，與對(duì)照組比較均有顯著性差異(P＜0.

6、01)，變化趨勢(shì)與血漿中相同。(2)血漿和BALF中TXB2的變化：對(duì)照組血漿和BALF中TXB2濃度各時(shí)間點(diǎn)間均無(wú)顯著性差異(P分別為0.80，0.82)。BLM組血漿中TXB2水平于第3天、7天、l4天、28天均升高，分別為102.92±6.02pg/ml、139.59±9.03pg/ml、91.74±8.86pg/ml、62.11±6.73pg/ml，與對(duì)照組比較均有顯著性差異(P＜0.01)。3天時(shí)血漿中TXB2濃度升高，7天達(dá)