聚苯乙烯-丙烯酰胺共聚納米球載TGF-β抑制劑-CpG用于肝癌的免疫治療.pdf

1、納米載體可輸送多種藥物，通過親水性修飾在體內(nèi)可長(zhǎng)循環(huán)，可通過EPR效應(yīng)被動(dòng)靶向積累在腫瘤部位，智能型的納米載體還可緩控釋藥物，廣泛應(yīng)用于腫瘤免疫治療的研究。本文目的在于構(gòu)建一種納米材料載免疫制劑TGF-β抑制劑/CpG，研究該納米藥物對(duì)肝癌的免疫治療效應(yīng)。
　　本文主要研究工作包括：
　　1.對(duì)聚苯乙烯-丙烯酰胺共聚納米球（Pst-Amm）進(jìn)行表面功能基團(tuán)的修飾，經(jīng)EDC/NHS反應(yīng)修飾上聚乙亞胺（PEI）、PEG，通過疏水

2、作用載入 TGF-β抑制劑LY2157299（LY），正負(fù)電荷吸附負(fù)載CpG。用動(dòng)態(tài)光散射及透射電鏡對(duì)納米粒進(jìn)行表征，修飾前后納米材料性狀未發(fā)生改變，PS、PS-LY、PS-LY-CpG均為分散性好的球形，粒徑大小分別為237.2、261.4、331.2nm，zeta電位分別為37.9 mV、39.9 mV、-25.5 mV。
　　2.通過高效液相色譜儀（HPLC）來檢測(cè) LY的載藥量，通過紫外分光光度計(jì)來檢測(cè)CpG的負(fù)載量。LY

3、的體外累積釋放用HPLC來檢測(cè)。3mg PS可載LY0.658mg，負(fù)載CpG約70μg。24h體外釋放LY10.56％，隨后持續(xù)平穩(wěn)釋放，具有緩控釋性。
　　3.通過MTT實(shí)驗(yàn)，探討了PS-LY-CpG對(duì)正常細(xì)胞HEK293的生物安全性評(píng)價(jià)。在24h、48h、72h時(shí)即使在高濃度PS-LY-CpG也沒有明顯的細(xì)胞毒性，PS-LY-CpG的生物安全性較好。
　　4.建立小鼠H22肝癌皮下瘤模型，在接種后的第8天開始分組進(jìn)行瘤

4、內(nèi)注射給藥，分別注射LY、CpG、LY+CpG、PS-LY、PS-CpG、PS-LY-CpG，模型組給予PBS。每3天給藥，給藥期間稱量體重和測(cè)量瘤體積。動(dòng)物給藥實(shí)驗(yàn)后取血清測(cè)IL-12p70、TNF-α細(xì)胞因子水平，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾臟中CD3、CD4、CD8 T細(xì)胞水平，取皮下瘤稱重后進(jìn)行HE染色，脾臟進(jìn)行CD3、CD4、CD8免疫組化。結(jié)果：PS-LY-CpG組比模型組體重增長(zhǎng)平穩(wěn)，生理狀態(tài)良好；瘤體積增長(zhǎng)最緩慢，抑瘤率達(dá)到99.

5、67%；脾臟的CD3、CD4、CD8 T細(xì)胞流式結(jié)果與免疫組化結(jié)果顯示，CD3、CD8 T細(xì)胞含量較PBS組高，CD4 T細(xì)胞含量較PBS組少；IL-12p70、TNF-α細(xì)胞因子水平可能恢復(fù)正常水平但較模型組高。
　　綜上所述，PS共聚納米球共載LY與CpG具有良好的理化性質(zhì)，可能的機(jī)制是通過增加CD8 T細(xì)胞的水平，提高IL-12p70、TNF-α細(xì)胞因子的水平，從這兩方面增強(qiáng)了對(duì)腫瘤的免疫治療，是一種在肝癌及其他癌癥方面具有