天然產(chǎn)物D5、S3及其衍生物抗腫瘤活性的初步研究.pdf

1、本論文從抗腫瘤活性化合物D5出發(fā)，通過MTT法確定其敏感細胞株，并對其同系物和衍生物進行了抗腫瘤活性測定：采用熒光滴定法對D5的疑似靶蛋白TR3的相互作用進行了初步研究，采用正交試驗對TR3的表達條件進行了優(yōu)化，并得到了TR3的晶體。此外，采用MTT法對S3的抗腫瘤活性進行研究，并對S3及其衍生物SA—1進行體外抗腫瘤活性的對比。采用流式細胞儀分析技術(shù)，研究化合物S3以及SA—1對ROS含量、細胞周期的影響。在此基礎(chǔ)上，對化合物S3的作

2、用機制以及急性毒性進行了初步研究。 通過以上研究，獲得了一些有意義的結(jié)果： 1、采用MTT法對化合物D5的體外抗腫瘤活性進行了初步研究。選用9株人源、鼠源的細胞株對D5的細胞毒活性進行測定，結(jié)果表明化合物D5對細胞的抑制作用具有特異性。在所選的5株腫瘤細胞株中，人胃癌細胞BGC—823對D5最為敏感，其IC50為3.550μg/mL，而化合物D5對正常細胞HL7702、Aml—12等細胞的毒性小于陽性對照。 2、

3、對GST—TR3(LBD)融合蛋白進行體外異源表達，采用熒光滴定方法檢測化合物D5與其疑似靶蛋白TR3(LBD)的相互作用。首先，在優(yōu)化并確定M9培養(yǎng)基成分的基礎(chǔ)上，采用4因素3水平的正交試驗對表達條件進行優(yōu)化，得出IPTG濃度以及誘導(dǎo)前菌濃是影響目的蛋白表達量的最關(guān)鍵因素，其中IPTG的最佳濃度確定為0.3mmol/L，最佳菌濃對應(yīng)OD600約為0.77，在此條件下蛋白表達量優(yōu)化達到2.0mg/L(與LB培養(yǎng)基產(chǎn)量近似)。熒光滴定實驗

4、結(jié)果表明，化合物D5與TR3有較強的相互作用，二者的結(jié)合常數(shù)約為2.30×109。 3、采用MTT法對通過化學(xué)合成得到的D5的49個衍生物(包括Zhn、Lix、Wj以及Lwj等系列)進行了抗腫瘤活性測定。以Zhn89(化學(xué)合成的D5)為對照，經(jīng)過體外抗腫瘤活性的初步篩選，從49個化合物中篩選出10個活性較強的化合物。以啤酒酵母、白色假絲酵母為指示菌，對以上11個化合物(包括D5)以及苯環(huán)上帶有三羥基的6個化合物進行抗真菌活性測定

5、，結(jié)果表明，化合物D5、Zhn89、Zhn111、Zhn196a、Lwj126以及Wj94對啤酒酵母有較強的抑制作用，其MIC為100μM～140μM；僅有D5對白色假絲酵母有抑制活性，其MIC為 100μM。 4、選用10株人源、鼠源的細胞株對S3的細胞毒活性進行測定，研究結(jié)果表明，該化合物對細胞的抑制作用具有特異性。在所選7株腫瘤細胞株中，人子宮頸癌細胞Hela對S3最為敏感，其IC50為1.275μg/mL?；衔?/p>

6、S3對正常細胞HL—7702、Aml—12等的細胞毒性略低于陽性對照。 5、通過形態(tài)觀察、DAPI核染色、流式細胞儀檢測以及Western blotting等分析方法對S3的作用機理進行了初步研究，發(fā)現(xiàn)該化合物可以誘導(dǎo)Hela細胞凋亡。 急性毒性實驗表明其LD50大于2000mg/kg體重，屬低毒化合物，具有進一步開發(fā)研究的價值。 6、化合物SA—1是S3的衍生物，MTT法測定結(jié)果表明二者對Heia細胞均有抑制活