抗Aβ-,31-35-抗體對大鼠海馬長時程增強、學(xué)習(xí)記憶行為和皮層神經(jīng)元的保護作用研究.pdf

1、山西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文抗Aβ抗體對大鼠海馬長時程增強、學(xué)習(xí)記憶行為和皮層神經(jīng)元的保護作用研究姓名：程麗申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生理學(xué)指導(dǎo)教師：祁金順20090603山西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文物海馬突觸可塑性的作用，提示3 1 ．3 5 片段是A l l 發(fā)揮神經(jīng)毒作用的活性中心，有可能成為新的治療靶點。我們設(shè)想，設(shè)計并使用特異性的抗A 1 3 3 l - 3 5 抗體有可能：( 1 ) 特異性封閉A I ] 活性中心，從而對抗那些從A

2、P P 上解離下來、并存在于彌散性或神經(jīng)炎性斑塊中的A p的神經(jīng)毒性；( 2 ) 避免與A P P 分子上恰好位于細胞膜跨膜部分的3 1 ．3 5 序列結(jié)合，從而不影響A P P 分子正常的生理功能；( 3 ) 避免主動免疫時直接使用抗原本身引起的神經(jīng)毒性；( 4 ) 經(jīng)腦內(nèi)或腦室內(nèi)給藥，減少抗A p 抗體外周給藥引起的腦血管損傷。為此，本實驗將在我們多年來關(guān)于A l l 神經(jīng)毒性作用活性中心研究的基礎(chǔ)上，應(yīng)用特異性的抗A p 3 1

3、．3 5 抗體，并通過反映突觸傳遞可塑性變化的在體海馬L T P 實驗、反映學(xué)習(xí)和記憶功能的動物行為學(xué)M o r r i s 迷宮實驗、反映A 1 3 神經(jīng)毒性作用的培養(yǎng)神經(jīng)細胞活力測定實驗，觀察抗A D 3 l - 3 5 抗體能否對抗A 1 3 l _ 4 2 引起的神經(jīng)毒性作用，從而為A D 免疫學(xué)治療提供一個針對性更強、更有效，也可能是更安全的被動免疫策略。實驗分以下三部分進行。第一部分：抗A p 3 。- 3 5 抗體保護大鼠

4、在體海馬長時程增強免受A l l ，- 4 2 引起的傷害本實驗通過急性側(cè)腦室內(nèi)注射A 1 3 l - 4 2 和抗A 1 3 3 1 ．3 5 抗體并記錄海馬場興奮性突觸后電位( f i e l de x c i t a t o r yp o s t s y n a p t i cp o t e n t i a l , f E P S P ) ，觀察了A p l - 4 2 和抗A p 3 1 - 3 5 抗體以及二者聯(lián)合應(yīng)用對大鼠海

5、馬C A1 區(qū)在體L T P 的影響，旨在探討抗A 1 3 3 l - 3 5 抗體拮抗A p 神經(jīng)毒性作用的L T P 保護效應(yīng)。實驗采用雄性W i s t a r 大鼠，麻醉后將其固定在腦立體定位儀上，分別將腦室套管和綁定的同心圓雙極刺激電極和單極記錄電極，精確插入到側(cè)腦室和海馬刺激與記錄部位。通過給予海馬S c h a f f e r 側(cè)枝單個電刺激、高頻刺激( h i g h f r e q u e n c ys t i m u

6、 l a t i o n , H F S ) 和雙脈沖刺激，在海馬C A l 區(qū)放射層誘發(fā)和記錄基礎(chǔ)的t E P S P 、H F S 引起的f E P S P 的長時程增強即L T P 、以及配對脈沖引起的雙脈沖易化( p a i r e d p u l s e f a c i l i t a t i o n ,P P F ) 。經(jīng)腦室套管向側(cè)腦室內(nèi)注射A 1 3 l - 4 2 和抗A p 3 1 - 3 5 抗體，觀察各種藥物對基

7、礎(chǔ)f E P S P 、L T P 以及P P F 的影響。結(jié)果顯示：( 1 ) 腦室內(nèi)A p l 4 2 預(yù)處理不影響基礎(chǔ)的突觸傳遞，但顯著地抑制了高頻刺激引起的海馬在體L T P 。給予H F S 后1 m i n ，3 0 m i n 和6 0 m i n 時，對照組( 磷酸緩沖液，P B S ) t E P S P s 幅度分別增加至2 1 3 ．7 + 6 ．0 ％，1 7 5 ．9 - a ：6 ．3 ％和1 6 6 ．3

8、+ 7 ．1 ％，表現(xiàn)出明顯的L T P效應(yīng)；而A D l - 4 2 預(yù)處理3 0m i n 并給予H F S 后，t E P S P s 幅度分別降至1 6 2 - 4 ：7 ．6 ％，1 2 6 ．5 + 6 ．7 ％和1 1 4 + 5 ．4 ％( p < O ．0 1 ) ，表明A p l - 4 2 強烈抑制了海馬在體L T P 。( 2 ) 抗A p 3 1 ．3 5 抗體本身預(yù)處理既不影響基礎(chǔ)的突觸傳遞又不影響高頻