蝎毒BmBKTx1結構與功能的研究前體蛋白加工酶furin的研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩127頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、本論文主要涉及三個方面的工作。第一部分:蝎毒BmBKTx1雙功能面的研究;第二部分:前體蛋白加工酶furin在胞內定位的研究:第三部分:基于組蛋白H1.2片段的furin抑制劑的研究。 1.蝎毒BmBKTx1雙功能面的研究 在漫長的3.5億年的生存選擇中,蝎子逐漸進化出了形形色色,功能各異的神經活性多肽,這些多肽是它們進攻與防御的主要武器,大多作用于各類Na+和K+通道。鉀離子通道是生物體中最基礎的功能蛋白之一,對鉀離子

2、有高度離子選擇通透性,在生理的變化過程中起著重要的作用。目前,蝎活性多肽已經成為研究K+通道的藥理,生理,結構和功能特性的最有力的工具。BmBKTx1是從東亞馬氏鉗蝎中純化到的一個新型短鏈毒素。它由31個氨基酸殘基組成,含3對二硫鍵,與SK(低電導鈣激活型鉀通道)毒素的一級結構比較相似,但僅僅具有比較弱的SK阻斷活性。實驗表明BmBKTx1對高電導鈣激活型鉀通道(BK)有明顯的抑制作用,同時它不具有對電壓門控型鉀通道(Kv)的抑制活力。

3、BmBKTx1是第一個報道的能同時作用于BK和SK的蝎毒素,它具有一定的昆蟲選擇性,也是第一個能作用于果蠅BK通道(dSlo)的蝎毒素。 BmBKTx1是第一個被確認的能夠同時作用于BK通道和SK通道的蝎毒素。它有可能是通過兩個不同的功能面來作用于這兩個通道。為了證明這個假設,本文在大腸桿菌中重組表達了BmBKTx1的野生型和它的兩個突變體,K21A-Y30A和R9A-K11A,并測定了它們對蟑螂的BK通道(pSlo)和大鼠的

4、SK2通道的阻斷活性。結果表明突變體K21A-Y30A對BK通道的阻斷活性有著明顯的降低,但是對SK通道的阻斷活性沒有變化。而突變體R9A-K11A對BK通道和SK通道的阻斷活性均沒有變化。這些結果證實了BmBKTx1具有雙功能面的假設,并且確認了它的BK功能面位于毒素C端的β折疊上。這些結果可以促進BmBKTx1在BK通道疾病的治療,搜尋鉀通道毒素,以及殺蟲劑等方面的應用開發(fā)。 2. Mint3與furin相互作用調控了fur

5、in在高爾基體上的定位 多肽或蛋白質以前體形式合成后,需要前體蛋白加工酶的剪切才能獲得完全的生物活性。這些前體蛋白加工酶成為生物體內重要的生理病理過程的調控者。Furin是發(fā)現(xiàn)得最早且功能研究最為清楚的哺乳動物前體加工酶,許多重要的生理過程需要furin的參與,如多肽與蛋白質激素的合成與分泌、膜受體的成熟、血漿蛋白前體的激活等;同時多種疾病的發(fā)生也與furin密切相關,如病毒外殼蛋白和細菌外毒素的加工活化以及腫瘤的轉移等。現(xiàn)階段

6、雖然對furin的細胞內定位和自身加工成熟有較多研究,但很多具體機制和細節(jié)并不清楚。因此,對furin相互作用蛋白質的鑒定和功能分析不僅具有重要的理論意義,也有利于開發(fā)抗病毒和抗細菌外毒素的先導藥物。 前體加工酶furin在細胞內分泌后,在質膜,內吞體和高爾基體(TGN)之間循環(huán),主要分布于高爾基體。Mint3是Mint接頭蛋白家族的成員,可以調控膜蛋白的運輸和分泌。迄今為止,對于在furin的運輸和定位過程中,mint3所起的

7、作用仍然了解得很少。本文通過免疫共沉淀和免疫熒光共定位的實驗,證明了mint3和furin可以相互作用,并且它們在HeLa細胞里共定位于高爾基體。通過RNA干擾的方法下調內源mint3的表達之后,furin的高爾基體定位被破壞,同時增加了其在內吞體中的分布。進一步的實驗表明mint3通過PTB結構域(phosphotyrosine binding domain)與furin相結合,并調控了furin在高爾基體上的定位。此外,對furin

8、進行突變發(fā)現(xiàn),mint3主要通過和furin的酸性多肽信號區(qū)相互作用來調節(jié)furin的分布。我們的實驗結果第一次發(fā)現(xiàn),mint3通過PTB結構域與furin的酸性多肽信號區(qū)相互作用調控了furin在高爾基體上的特異性定位。這些結果闡明了一條新的furin在細胞內定位和轉運的途徑,提供了furin相關疾病的新的藥物靶點,有利于治療學方面的發(fā)展。 3.基于組蛋白H1.2片段的furin抑制劑的設計改造 在哺乳動物的許多生理和

9、病理活動中,前體加工酶furin起到了非常重要的作用,例如對病毒糖蛋白和細菌毒素的激活。尋找小分子量,無毒性,高活力的furin抑制劑是解決該類疾病的非常有吸引力的藥物設計途徑。本文根據(jù)furin的抑制劑histone H1.2的C端片段設計和合成了一系列的短肽抑制劑。將抑制劑的活性位點替換成為furin的最佳底物識別位點,可以極大地增強抑制劑的抑制活性。在所設計的短肽抑制劑中,抑制活力最好的是一條14肽的抑制劑,對furin的抑制常數(shù)

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論