連翹提取物對(duì)甲型流感病毒核蛋白表達(dá)影響的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景:
　　流感可引起季節(jié)性流行和大流行，嚴(yán)重危害人民健康。目前抗流感病毒西藥因毒副作用較大或耐藥性的增加，限制了其應(yīng)用。祖國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)藥在預(yù)防與治療流感的臨床和基礎(chǔ)理論方面的研究，受到國(guó)內(nèi)外的廣泛關(guān)注，尋找新的抗流感中藥及探索其作用機(jī)制，有助于將中藥推向世界和造福人類。
　　目的:
　　探討連翹提取物（連翹苷、連翹醇提液、連翹水煎劑）對(duì)甲型流感病毒核蛋白基因體外干預(yù)的影響，為連翹抗流感病毒提供科學(xué)的理論依據(jù)。
　

2、　方法:
　　1.實(shí)驗(yàn)分組: HeLa細(xì)胞組（HeLa細(xì)胞）、空質(zhì)粒組（空質(zhì)粒和HeLa細(xì)胞）、脂質(zhì)體組（HeLa細(xì)胞和脂質(zhì)體）、重組質(zhì)粒組（重組質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞）、連翹苷組（連翹苷加入重組質(zhì)粒組中）、連翹水煎劑組（連翹水煎劑加入重組質(zhì)粒組中）、連翹醇提液組（連翹醇提液加入重組質(zhì)粒組中）七組。
　　2.細(xì)胞病變法確定連翹提取物最大無(wú)毒界限及實(shí)驗(yàn)用濃度。
　　3.脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞，并以其作為實(shí)驗(yàn)用

3、靶細(xì)胞。
　　4.膠體金免疫層析試紙法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞培養(yǎng)上清和細(xì)胞內(nèi)核蛋白的表達(dá)。
　　5.提取膠體金檢測(cè)陰性組及重組質(zhì)粒組細(xì)胞總RNA，合成eDNA。
　　6.熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)重組質(zhì)粒組及膠體金檢測(cè)陰性組的核蛋白基因拷貝數(shù)，用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:
　　1.重組質(zhì)粒組細(xì)胞培養(yǎng)上清及細(xì)胞內(nèi)膠體金法檢測(cè)均為陽(yáng)性;連翹醇提液組、連翹水煎劑組兩組細(xì)胞培養(yǎng)上清為弱陽(yáng)性，醇提液組更弱些;連翹苷組、

4、連翹醇提液組、連翹水煎劑組三組細(xì)胞內(nèi)為弱陽(yáng)性，連翹苷組最弱，連翹醇提液組次之;細(xì)胞對(duì)照組、脂質(zhì)體組、空質(zhì)粒組和連翹苷組四組細(xì)胞培養(yǎng)上清及細(xì)胞對(duì)照組、脂質(zhì)體組、空質(zhì)粒組三組細(xì)胞內(nèi)均為陰性。
　　2.連翹苷組胞內(nèi)核蛋白基因表達(dá)量為（2.07±0.2）×105copies·μl-1，重組質(zhì)粒組胞內(nèi)核蛋白基因表達(dá)量為(61.2±13)×105copies·μl-1，連翹苷組胞內(nèi)核蛋白基因表達(dá)量低于重組質(zhì)粒組胞內(nèi)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.