丁香葉乙醇提取物抗豬流感病毒的研究.pdf

1、豬流感(swine influenza，SI)是由正黏病毒科豬流感病毒(swine influenza virus，SIV)引起的豬急性高度傳染性疾病。主要臨床癥狀表現(xiàn)為體溫升高、食欲不振、呼吸困難、咳嗽、流產(chǎn)以及延遲出欄等。SI一旦發(fā)生，將會(huì)給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大損失，尤其當(dāng)與其它呼吸道疾病繼發(fā)或混合感染時(shí)，損失更是無(wú)法估量。SIV不僅可感染豬，同時(shí)也具有感染禽類(lèi)和人、馬等其他哺乳動(dòng)物的能力。而且豬可被禽流感病毒(Avian Influen

2、za Virus，AIV)和人流感病毒感染，是流感病毒新毒株產(chǎn)生的“孵育器”。SIV及豬的這些特征決定了它們?cè)诹鞲胁《镜姆N間傳播中具有不可替代的地位。所以，SI除了其重要的獸醫(yī)衛(wèi)生學(xué)意義外，更重要的還在于其顯而易見(jiàn)的公共衛(wèi)生學(xué)意義。目前預(yù)防SI發(fā)生與傳播的最有效方式是疫苗接種，但是由于SIV亞型多，變異快，制備有效的疫苗困難重重，而抗流感病毒的化學(xué)合成藥物既有較強(qiáng)的毒副作用，又容易誘導(dǎo)病毒產(chǎn)生耐藥性。這種現(xiàn)狀下，在我國(guó)的中醫(yī)藥寶庫(kù)中尋找

3、有效藥物、研發(fā)新型制劑來(lái)防治SI就成為一項(xiàng)很有意義的研究工作。丁香葉是木犀科丁香屬植物朝鮮丁香（Syringa diatata Nakai）、洋丁香（Syringa vulgaris L.）或紫丁香（Syringa oblata Lindl）的干燥葉，具有廣譜的抗菌和抗病毒的作用，但尚未見(jiàn)有關(guān)丁香葉對(duì)SIV作用的研究報(bào)道。因此本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)丁香葉乙醇提取物體內(nèi)外抗SIV的試驗(yàn)研究及其對(duì)SIV感染小鼠血清中細(xì)胞因子的影響，闡明丁香葉抗SIV

4、作用和其可能的作用機(jī)理，為臨床防治SI提供理論依據(jù)。
　　 體外試驗(yàn)首先采用細(xì)胞病變法(CPE)和噻唑藍(lán)(MTT)比色法測(cè)定丁香葉醇提物(EFFL)及陽(yáng)性藥物金剛烷胺(AMA)對(duì)狗腎細(xì)胞(MDCK)的毒性，確定其半數(shù)有毒濃度(TC50)和最大無(wú)毒濃度(TC0)，然后觀察丁香葉醇提物及金剛烷胺在不同作用方式下（先感染病毒后加藥、先加藥后感染病毒、感染病毒同時(shí)加藥、藥與病毒作用后再加）對(duì)SIVA/swine/Tianjing/14/

5、2009(H1N1)的體外抑制作用。結(jié)果顯示:丁香葉醇提物對(duì)MDCK細(xì)胞的TC0為250μg/mL， TC50為759.98±9.42μg/mL:金剛烷胺對(duì)MDCK細(xì)胞的TC0為31.3μg/mL，TC50為368.43±7.28μg/mL。在不同作用方式下給藥（先感染病毒后加藥、先加藥后感染病毒、感染病毒同時(shí)加藥、藥與病毒作用后再加），丁香葉醇提物的治療指數(shù)(TI)分別為13.52,6.82,15.76,16.30μg/mL。

6、　　 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)首先驗(yàn)證丁香葉醇提物對(duì)Balb/c小鼠的毒性，確定無(wú)毒濃度。然后通過(guò)鼻腔感染SIV，復(fù)制SIV Balb/c小鼠模型，并采取灌胃給藥的方式，觀察丁香葉醇提物對(duì)SIV感染小鼠的體重、肺指數(shù)、肺臟病毒滴度以及肺臟病理組織變化的影響，最后采用ELISA方法檢測(cè)小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10的水平，評(píng)價(jià)丁香葉醇提物抗SIV作用及其可能的作用機(jī)制。結(jié)果顯示:Balb/c小鼠對(duì)丁香葉醇提物的最大耐受濃度為10

7、00 mg/kg/d;丁香葉醇提物能明顯降低肺指數(shù)、肺臟病毒滴度、改善肺臟病理變化;豬流感病毒感染Balb/c小鼠后，感染模型組TNF-α，IL-6及IL-10的含量均高于正常對(duì)照組（P＜0.05），IFN-γ的含量則有所下降（P＜0.05）。與模型組相比，丁香葉醇提物可以明顯升高血清中IFN-γ、IL-10水平（P＜0.05），降低TNF-α、IL-6水平（P＜0.05）。綜上所述，丁香葉醇提物不僅具有很好的抗豬流感病毒的作用，而且可