共軛亞油酸對前脂肪細胞3T3-L1的作用研究.pdf

1、共軛亞油酸(conjugated linoleic acid，CLA)是一組位置和幾何異構(gòu)體的十八碳共軛二烯酸的統(tǒng)稱。其雙鍵位于7，9；8，10；9，11；10，12；或11，13位置上，其中每個雙鍵又有順式和反式兩種構(gòu)型，即每個CLA的位置異構(gòu)體有四種不同的幾何異構(gòu)體。因此CLA可形成多種同分異構(gòu)體。 天然的CLA主要存在于反芻動物的奶、肉的脂肪中。最主要的CLA異構(gòu)體為c9,t11-CLA和t10,c12-CLA。牛瘤胃中

2、c9,t11-CLA是厭氧溶纖維丁酸弧菌生物氫化亞油酸過程中的產(chǎn)物，此外還有一些細菌，如乳酸菌也可將亞油酸生物轉(zhuǎn)化為CLA。 CLA有多種生物活性，如抗癌、抗動脈粥樣硬化，免疫調(diào)節(jié)和抗肥胖等。近年來，對CLA減肥活性的研究引起了廣泛的注意。 本研究中利用3種CLA，包括t10,c12-CLA，c9,t11-CLA，以及cg,t11-CLA和tg,t11-CLA的混合物，采用不同濃度(25，50，100，2001μmol/

3、L)，不同作用時間(1d，2d，3d)，研究了3種CLA對前脂肪細胞3T3-L1的作用。 采用MTT法分析了CLA對前脂肪細胞3T3-L1增殖的抑制作用；結(jié)果表明，t10,c12-CLA和CLA混合物對3T3-L1細胞均有顯著抑制增殖作用(P<0.05)，前者作用大于后者。t10,c12-CLA的抑制作用在100μmol/L時抑制作用最強，并隨處理時間增加而抑制效果增強；CLA混合物抑制作用隨濃度增大、處理時間增加而增強。c9,

4、t11-CLA對前脂肪細胞3T3-L1細胞增殖沒有顯著作用(P>0.05)。三種CLA在相同濃度，相同時間對3T3-L1增殖的抑制作用為：t10,c12-CLA最大，CLA混合物次之，隨后是c9,t11-CLA。 通過細胞形態(tài)觀察、油紅O染色，觀察了t10,c12-CLA以及CLA混合物對前脂肪細胞3T3-L1分化的影響。實驗分為50gmol/L，t10,c12-CLA處理組、100μmol/L t10,c12-CLA處理組、1

5、00μmol/L CLA混合物處理組、對照組(未加CLA)。采用“雞尾酒法”(DEX、IBMX、INSULIN混合誘導分化)分化3T3-L1細胞8天后，進行油紅O染色比色，結(jié)果表明，t10,c12-CLA可以顯著降低細胞內(nèi)脂肪生成量(為對照組的64.9％，P<0.05)，抑制前體脂肪細胞向成熟脂肪細胞分化，其中尤以100μmol/L，t10,c12-CLA作用效果最為明顯。 采用半定量RT-PCR技術(shù)，分析了t10,c12-C

6、LA對前脂肪細胞3T3-L1中PPARγ2 mRNA的表達水平的影響。實驗中對50μmol/L t10,c12-CLA處理組、100μmol/Lt10，c12-CLA處理組、對照組(未加CLA處理)對細胞PPAγ2 mRNA表達進行了分析。結(jié)果顯示：用100μmol/L和501μmol/L t10，c12-CLA處理后的細胞，其PPARγ2的mRNA的表達量分別為對照組的52.1％，83.0％，這表明t10，c12-CLA抑制脂肪細胞的