前軟骨干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響.pdf

1、目的：平板及微球培養(yǎng)純化的前軟骨干細(xì)胞（PSCs），對其進行動態(tài)壓應(yīng)力刺激及添加甲狀腺激素相關(guān)肽（PTHrP）干預(yù)，進一步揭示前軟骨干細(xì)胞的增殖、分化規(guī)律及其調(diào)控機制，為選擇有效干預(yù)措施治療骺板發(fā)育異常、修復(fù)及重建骺板等提供理論及實驗依據(jù)。
　　 方法：取材新生SD大鼠股骨干骺端軟骨，免疫磁珠分選純化，分別進行二維及三維分組培養(yǎng)，隨機分組后適宜壓應(yīng)力(90mmg)及添加不同濃度PTHrP干預(yù)下連續(xù)培養(yǎng)，并設(shè)對照組（不干預(yù)），細(xì)胞

2、計數(shù)及cck-8法檢測細(xì)胞增殖情況，免疫組化法測定三維培養(yǎng)軟骨細(xì)胞成軟骨特異性細(xì)胞外基質(zhì)II型膠原（Collagen II），RT-PCR法測定Collagen II、聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、PTHrP、X型膠原、TGF-β1等。根據(jù)實驗結(jié)果評價應(yīng)力及PTHrP對前軟骨干細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.免疫磁珠分選培養(yǎng)出生長狀態(tài)良好的前軟骨干細(xì)胞，免疫組化、免疫熒光鑒定顯示細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)相對特異性

3、標(biāo)志物FGFR-3與PCNA；適宜參數(shù)壓應(yīng)力刺激與PTHrP干預(yù)組細(xì)胞培養(yǎng)至5代以上仍狀態(tài)較好，而對照組細(xì)胞致5代已老化；
　　 2.細(xì)胞計數(shù)及cck-8法檢測細(xì)胞增殖能力有效干預(yù)組較對照組增大（P＜0.05）其中應(yīng)力刺激與PTHrP干預(yù)有協(xié)同效應(yīng)。
　　 3.RT-PCR檢測結(jié)果顯示有效刺激實驗組Collagen II、aggrecan、Sox9表達(dá)較空白對照組升高，X型膠原降低，（P＜0.05）90mmg壓力刺激組P