梅毒的快速診斷、免疫學以及分子生物學的研究.pdf

1、背景和目的：梅毒是由梅毒螺旋體感染引起的一種性傳播感染疾病，與HIV感染及其傳播率增長有關。因其癥狀隱匿，治療常常被延誤，導致更廣泛的流行和傳播。近些年來，很多國家包括中國都有梅毒復燃流行的報道，提醒我們必須采取措施制止梅毒的蔓延。在梅毒快速診斷方面，世界衛(wèi)生組織(World HealthOrganization，WHO)已經(jīng)選擇出一些具有高敏感性和特異性的試劑盒在全球范圍推廣。這些以重組抗原為基礎的試劑盒在梅毒篩查中有望取代傳統(tǒng)的篩查

2、及確證試驗，是未來大范圍檢測梅毒的高效檢測手段。在治療和預后方面，梅毒治療后的RPR滴度持續(xù)陽性，雖然視為臨床治愈，但其潛伏復發(fā)的危險使患者的心理負擔始終不能消除。故探索血清抵抗的原因，分析其與免疫學因素的關系，最終達到心理生理的痊愈也是我們的研究任務之一。在流行病學方面，從1999年開始，美國疾病控制中心(Centers for Disease Control and Prevention，CDC)已經(jīng)加大力度將消除梅毒作為一個全球性

3、目標。其中一個重要任務是監(jiān)控地方性爆發(fā)和傳播，阻止其擴散到其他地區(qū)。而我們要研究梅毒的地方性流行病學和地方性爆發(fā)，必須開展其基因分型的研究。此外，應用RT-PCR的梅毒螺旋體：DNA定量檢測方法，對于觀察治療效果、病情發(fā)展、尋找血清抵抗的原因等都是一個新的方法和思路。 方法： 1.梅毒的快速診斷： 1) 以TPHA為金標準，評估幾種重組梅毒螺旋體抗原為基礎的快速酶聯(lián)免疫診斷試驗在臨床上的應用價值。 2)比

4、較傳統(tǒng)的快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗(RPR)與重組梅毒螺旋體抗原為基礎的梅毒快速試驗的敏感性和特異性。 2.梅毒的免疫學研究： 1)118例梅毒療后的RPR滴度變化的臨床資料分析?；仡櫺苑治龅味鹊某掷m(xù)陽性與其年齡、性別、初始滴度、病期、治療藥物等相關影響因素的關系。 2)與健康對照組比較，分析梅毒治療前和治療后血清抵抗的免疫學特點。 3.梅毒螺旋體的分子生物學研究： 1)提取梅毒患者外周血中的基因

5、組DNA，篩選陽性標本進行基因分型：用巢式PCR以及RFLP技術，對不同病程時期的患者進行基因分型，是梅毒流行病學研究的基礎。 2)DNA載量：正規(guī)驅梅治療前后，比較梅毒螺旋體在血液中的載量變化。通過RT-PCR方法，對6例外周血樣本DNA的表達進行半定量分析。 結果： 1.1)幾種試劑盒在血清檢測及全血檢測中均表現(xiàn)優(yōu)良，血清敏感性很高。①Abbott Determine Syphilis TP test：敏感性

6、為100％，特異性為98.9％。②SDBIOLINE Syphilis 3.0 test：敏感性為95.5％，特異性為97.9％。③VISITECT-SYPHILIS test：敏感性為94.0％，特異性為98.1％。④Syphicheck-WBtest：敏感性為67.4％，特異性為98.8％。 2)Abbott Determine Syphilis TP test：血清敏感性為100％，特異性為98.4％。RPR test：血

7、清敏感性為65.1％，特異性為98.4％。 2.1)血清抵抗的統(tǒng)計學分析結果：不同年齡組、性別組分析分別比較P<0.05。初始滴度分組P<0.05，差異有顯著性，滴度為1：8患者抵抗比例高達61％。不同病期P<0.05，差異有顯著性，潛伏梅毒比例高達45.6％，而一期梅毒血清抵抗者僅占10％。不同藥物種類分組P<0.05，差異有顯著性，芐星青霉素療后血清抵抗比例只有28.3％，而大環(huán)內酯類為72.7％。 2)未治梅毒患者

8、組、血清抵抗梅毒患者組及健康組的T淋巴細胞亞群和NK細胞檢測結果經(jīng)統(tǒng)計學分析差異無顯著性。 3.1)67例外周血標本中，32例為持續(xù)RPR陽性患者和5例RPR已經(jīng)陰轉的患者，檢測梅毒螺旋體DNA結果均為陰性。30例RPR滴度在1：32-1：128之間的患者外周血中，檢測到梅毒螺旋體DNA陽性的為5例。將這5例進一步進行巢式PCR檢測，得到3種亞型：1個13c，2個14b，2個14d。 2)治療前患者血液中梅毒螺旋體的DN

9、A載量明顯高于療后。 結論： 1.4種以重組梅毒螺旋體抗原為基礎的試劑盒在臨床實驗中，血清檢測比全血檢測具有敏感性更高、特異性更強，適合應用于STD門診的梅毒檢測。以重組梅毒螺旋體抗原為基礎的試驗方法與RPR試驗相比，具有更高的敏感性。 2.潛伏梅毒、初始滴度較低者、以及治療應用大環(huán)內酯類藥物后的梅毒患者的血清抵抗率較高，統(tǒng)計學比較差異具有顯著性。免疫學檢測梅毒未治患者以及血清抵抗患者的T淋巴細胞亞群及NK細胞值