清肝抑纖飲及其拆方防治大鼠肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:觀察清肝抑纖飲及其拆方對(duì)大鼠肝纖維化的防治作用,并探討其作用機(jī)制。
　　方法:110只Wistar大鼠按隨機(jī)原則分為9組?？瞻讓?duì)照組給予普通飼料喂養(yǎng),自由飲水。其余各組均給予四肢及背部皮下注射40％CCl4-花生油溶液,按照0.3ml/100g,每周注射兩次,同時(shí)給予中藥或生理鹽水灌胃,共8周。8周后進(jìn)行成模檢驗(yàn),明確造模成功后,將其余大鼠全部處死,測(cè)量大鼠體重及肝臟濕重,計(jì)算肝臟臟器指數(shù);檢測(cè)各組大鼠血清肝功能指標(biāo)(ALT

2、、AST、ALB)、血清肝纖維化指標(biāo)(HA、LN、C-IV);檢測(cè)各組大鼠肝組織勻漿丙二醛(MDA)含量以及超氧化物岐化酶(SOD)活性;ELISA法檢測(cè)大鼠肝組織勻漿腫瘤壞死因子-α(TNF-a)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)及組織金屬蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)濃度;采用RT-PCR法檢測(cè)肝組織TGF-β1mRNA表達(dá);TUNEL一步法檢測(cè)肝星狀細(xì)胞凋亡;肝組織病理學(xué)觀察:HE染色半定量

3、觀察肝組織炎性程度;Masson染色觀察肝內(nèi)膠原沉積與降解狀態(tài);免疫組織化學(xué)的方法觀察α-SMA在各組大鼠肝組織內(nèi)的表達(dá),結(jié)果作定量分析。
　　結(jié)果:實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后發(fā)現(xiàn):1、清肝抑纖飲及其拆方可使血清ALT、AST含量下降,ALB升高,升高SOD活性,降低MDA含量,顯著改善肝臟炎癥程度及減輕脂質(zhì)過氧化損傷,全方組療效優(yōu)于各拆方組,拆方研究發(fā)現(xiàn)方中清熱解毒及涼血活血藥物起主要作用;2、清肝抑纖飲及其拆方可使肝組織中α-SM

4、A表達(dá)明顯降低,抑制HSC活化,方中清熱解毒與涼血活血藥物的配伍在抑制HSC活化過程中起主要作用,各治療組大鼠HSC凋亡率均有所升高,但與模型組比較無顯著性差異;3、肝纖維化大鼠TGF-p1從mRNA到蛋白水平均明顯異常表達(dá),其升高程度與肝纖維化的嚴(yán)重程度相關(guān),清肝抑纖飲及其拆方可明顯降低其表達(dá),與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.01,P＜0.01);4、清肝抑纖飲及其拆方可顯著降低肝組織TNF-α含量,含有清熱解毒藥物的組別療效明顯

5、;5.清肝抑纖飲及其拆方可使TIMP-2降低,提高M(jìn)MP-2/TIMP-2比例,含有涼血活血藥物的組別療效較為顯著,其中全方組療效最好,與模型組比較有顯著性差異(P＜0.01)。
　　結(jié)論:清肝抑纖飲具有明確的防治肝纖維化作用,其主要作用機(jī)制為:1、減輕肝細(xì)胞變性壞死及肝臟脂質(zhì)過氧化損傷程度,改善肝臟炎癥,提高其抗氧化能力,促進(jìn)肝細(xì)胞修復(fù),從而減少或消除肝纖維化的誘發(fā)因素,以阻斷肝纖維化的起始環(huán)節(jié);2、抑制HSC的活化,促進(jìn)其凋亡