免疫磁性微球制備方法及其應用研究.pdf

1、免疫磁性微球作為新型的功能材料近年來已被廣泛研究,其巨大的應用潛力特別是在生物醫(yī)學、生物工程等領域的應用引起了各國研究者的高度重視.該研究以免疫磁性微球作為實驗對象,探討了不同材料的磁性微球載體的制備方法,并進行了其在免疫檢測和分離純化方面的應用.該研究采用反相懸浮交聯(lián)法、反向懸浮包埋法、種子聚合法和無乳化劑乳液聚合法分別制備了聚乙烯醇、纖維素和瓊脂糖、聚苯乙烯、以及聚苯乙烯-丙烯酰胺5種磁性微球.確立磁性微球的最佳活化條件,并對包括制

2、備成本、磁響應性、磁滲漏性、機械強度以及蛋白偶聯(lián)量等方面性能進行了考察.選擇了制備簡單、物理吸附性能好的聚苯乙烯磁性微球作為免疫磁性捕獲-ELISA的載體;選擇了磁響應性、機械強度和蛋白偶聯(lián)量等綜合性能較好的纖維素磁性微球作為免疫磁性分離的載體.將兔Anti-GRP IgG抗體致敏聚苯乙烯磁性微球,結(jié)合生物素標記抗體和酶標親和素建立免疫磁性捕獲-ELISA(IMS-ELISA)法,并用于中藥制劑中甘草特異性蛋白(GRP)的檢測,與ELI

3、SA法相比較該方法甘草蛋白檢測準確率為100﹪,其靈敏度可達10ng/mL.利用兔Anti-BX IgG制備松材線蟲檢測用聚苯乙烯免疫磁性微球,建立IMS-ELISA法,并用于疫木中松材線蟲抗原的檢測.結(jié)果表明雖然該方法對擬松材線蟲也存在一定的交叉反應性,但疫木中松材線蟲抗原總檢出率為94.1﹪,其靈敏度可以達到0.1μg/mL線蟲蛋白抗原.采用纖維素免疫磁性微球?qū)w裂解液中的IFNα-2b進行一步免疫磁性分離,經(jīng)純化條件的優(yōu)化,其平

4、均活性收率可達到88﹪(c.v.=4.6﹪),平均比活性可達到1.5×10<'8>IU/mg(c.v.=6.7﹪),并顯示了良好的重現(xiàn)性.經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳分析,純度大于99﹪,純化樣品符合國家標準(1.0×10<'8>IU/mg,純度>95﹪).研究結(jié)果表明,該實驗制備的聚苯乙烯和纖維素免疫磁性微球分別適用于復雜樣品中抗原成分的鑒定和高純度目的蛋白的分離純化,具備操作簡單、快速、方便等特點,結(jié)果令人滿意.免疫磁性微球的應用為免