免疫磁性微球的制備及在乳腺癌診斷中的應(yīng)用研究.pdf

1、目前癌癥是困擾人類生活的幾大疾病之一，并且正成日趨增生的形勢(shì)?，F(xiàn)在平均每年癌癥發(fā)病率在22％左右。所以治療癌癥是件人們刻不容緩的主要任務(wù)。目前的醫(yī)療設(shè)施所檢測(cè)到的癌癥大多都屬于中晚期，發(fā)現(xiàn)的比較晚而此時(shí)的癌細(xì)胞以基本擴(kuò)散，藥物難以治療。戰(zhàn)勝癌癥最重要的是早發(fā)現(xiàn)，早期癌癥大都可以治愈。最初癌腫瘤細(xì)胞的無(wú)序生長(zhǎng)使其失去了相互黏附的能力，松散的腫瘤細(xì)胞可以進(jìn)入血管和淋巴管，進(jìn)入血液循環(huán)或淋巴循環(huán)，通過血液循環(huán)實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)移的細(xì)胞稱之為循環(huán)腫瘤細(xì)胞(

2、circulating tumor cells；CTCs)。腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的早期，循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)可以沿循環(huán)系統(tǒng)種植于遠(yuǎn)處器官，逐漸形成轉(zhuǎn)移灶。但是使用現(xiàn)有的、常規(guī)的、經(jīng)驗(yàn)性的診斷手段卻無(wú)法“看到”這樣的轉(zhuǎn)移過程。因此，研究發(fā)展一種新的可以檢測(cè)轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞的方法是非常有必要的。很多研究已經(jīng)證明，應(yīng)用檢測(cè)少量血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞簇(CTCs)的結(jié)果進(jìn)行分析，對(duì)推測(cè)每個(gè)獨(dú)立患者具體愈后，評(píng)估治療反應(yīng)的準(zhǔn)確性和有效性都可以有明顯改善。顯然，

3、單個(gè)細(xì)胞水平檢測(cè)外周血血中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)要比影像學(xué)分析更為敏感。最近發(fā)展出來的研究技術(shù)主要是通過包被在磁性微球上的特異抗體來結(jié)合“捕獲”循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)。乳腺癌細(xì)胞存在于人的乳腺相對(duì)于其它體內(nèi)癌細(xì)胞更容易受到外在的機(jī)械作用力從而也更容易脫落形成循環(huán)腫瘤細(xì)胞。進(jìn)而用特異性免疫磁性微球去捕獲早期乳腺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行早期檢測(cè)相對(duì)于其它癌癥的早期檢測(cè)更方便、準(zhǔn)確。本文將圍繞微米級(jí)免疫磁性微球的合成以及免疫磁珠的制備進(jìn)行研究

4、，重點(diǎn)放在考察制備條件，雜細(xì)胞的去除率，循環(huán)腫瘤細(xì)胞的捕獲率等。首先對(duì)磁性微球的粒徑大小，磁響應(yīng)性，表面羧基含量等方面進(jìn)行分析篩選出較適合制備免疫磁性微球的磁珠；然后用共價(jià)偶聯(lián)法合成免疫磁性微球復(fù)合體；再用此復(fù)合體去捕獲目的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)雜細(xì)胞的去除及循環(huán)腫瘤細(xì)胞的富集。具體的研究方法和結(jié)論概括如下：
　　 采用透射電鏡、掃描電鏡、電子顯微鏡測(cè)定微球粒徑，觀察表面形態(tài)。通過測(cè)電導(dǎo)率表征磁性微球(Magnetic polymer mi

5、crospheres)表面羧基含量。挑選出粒徑大小在10μm左右分布均勻，成球性較好，表面羧基含量在0.1～0.5mmol/g的磁性微球。在一定振蕩條件下，通過共價(jià)偶聯(lián)法制備免疫磁性微球復(fù)合體，分光光度計(jì)測(cè)定親和素(Neutravidin)的結(jié)合率。實(shí)驗(yàn)表明，親和素-磁性微球的制備過程中反應(yīng)溫度在4℃，親和素濃度0.2mg/ml,在pH值5.8的PBS反應(yīng)環(huán)境下反應(yīng)2h，其親和素載量在25～55mg/g。制備生物素化抗體時(shí)BNHS與抗體