微RNA在乳腺癌預(yù)防和診斷中的作用.pdf

1、乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，不僅嚴(yán)重威脅著女性的生活質(zhì)量和生命健康，而且對整個社會經(jīng)濟、家庭幸福均帶來不良影響。美國華盛頓大學(xué)研究人員估計2010年全世界乳腺癌新發(fā)患者約164萬，且乳腺癌的發(fā)病有明顯的人群和地區(qū)分布特點?？v觀近30年乳腺癌發(fā)病情況，即從1980的發(fā)病人數(shù)641000例到2010年1643000例，乳腺癌的發(fā)病率呈上升趨勢，年增長率為3.1％，可以說乳腺癌已逐漸成為女性第一大惡性腫瘤。乳腺癌的發(fā)生發(fā)展是一個多因素、多

2、步驟和多途徑的復(fù)雜過程，是環(huán)境因素和遺傳因素共同作用的結(jié)果，不能用已知的單個或多個乳腺癌的危險因素完全解釋或準(zhǔn)確預(yù)測不同國家、不同人群乳腺癌的發(fā)生率。乳腺癌一旦發(fā)生，早期診斷是提高療效的關(guān)鍵。因此，深入研究乳腺癌發(fā)生機制，尋找敏感性高、特異好的與乳腺癌相關(guān)的分子生物標(biāo)記，是乳腺癌研究的方向之一。
　　微RNA(microRNA)是自1993年以來生命科學(xué)領(lǐng)域的重大發(fā)現(xiàn)之一，在癌細胞中表達異常，其不僅種類繁多，并且一種microRN

3、A可以針對多個靶基因發(fā)揮作用，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、診斷、治療、預(yù)后中均有重要的價值，為腫瘤的防治提供了新的思路。近年來研究發(fā)現(xiàn)編碼microRNA的基因以及microRNA的靶基因結(jié)合位點存在單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)，可影響microRNA作為癌基因或抑癌基因的功能，使個體間腫瘤易感性存在差異。自2009年開始，不同國家地區(qū)的研究人員相繼開展了miR-146a、miR-196

4、a2和miR-499的SNPs與乳腺癌易感性的研究，其它的microRNA基因SNP與乳腺癌的研究報道相對較少，即使報道了，由于研究對象的選擇存在局限性，只報道部分國家或部分種族的人群，缺乏中國漢族人群的資料，因此我們開展了一項病例對照研究，以中國漢族人群為研究對象，研究miR-27a基因SNP與乳腺癌遺傳易感性的關(guān)系。microRNA不僅在乳腺瘤的發(fā)生中發(fā)揮作用，在其診斷中也有重要價值。在2008年，首次在血液中發(fā)現(xiàn)含有穩(wěn)定表達的循環(huán)

5、microRNA，但有關(guān)血循環(huán)microRNA在乳腺癌發(fā)病和診斷中的研究報道甚少，因此我們應(yīng)用定量PCR(polymerasechain reaction)檢測了乳腺癌患者和對照組血清中miR-182的水平，判斷血清中miR-182在乳腺癌診斷中的作用，為乳腺癌的診斷提供科學(xué)依據(jù)?，F(xiàn)有發(fā)表的關(guān)于microRNA基因SNP與乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險研究，由于存在隨機誤差或研究對象、研究設(shè)計等方面不同，即使針對相同microRNA基因SNP與乳腺癌

6、的研究結(jié)果也不全相同，而且單個研究的樣本數(shù)量相對較小，抽樣誤差相對較大。我們按照meta分析的要求及過程，開展了miR-146a、miR-196a2和miR-499的SNPs與乳腺癌易感性的meta分析，增大樣本含量，提高檢驗效能，得到更加真實可靠的結(jié)論，有助于從基因水平更好地認識乳腺癌的易感性，開展乳腺癌的預(yù)防工作。
　　本論文研究目的是探討microRNA在乳腺癌發(fā)生和診斷中的作用，為乳腺癌的預(yù)防控制提供科學(xué)依據(jù)。研究共分三部

7、分，即第一部分:miR-27a單核苷酸多態(tài)性與乳腺癌易感性的病例對照研究;第二部分:循環(huán)血清miR-182在乳腺癌診斷中的作用;第三部分:miR-146a、miR-196a2和miR-499單核苷酸多態(tài)性與乳腺癌易感性的meta分析。
　　第一部分:miR-27a單核苷酸多態(tài)性與乳腺癌易感性的病例對照研究。
　　目的：
　　以中國漢族人群為研究對象，檢測乳腺癌患者和對照人群miR-27a基因SNP(rs11671784

8、)的分布情況，探討其與乳腺癌易感性的關(guān)系。
　　方法：
　　采用病例對照研究方法，對中國山東地區(qū)112名乳腺癌患者和225名健康對照收集基本信息，采集外周血2ml，提取DNA，PCR擴增，限制性內(nèi)切酶BamHI對PCR產(chǎn)物進行酶切，檢測miR-27a(rs11671784)基因型，非條件logistic回歸分析得出調(diào)整前后的比值比(odds ratio，OR)和其95％可信區(qū)間(95％CI)。
　　結(jié)果：
　　乳

9、腺癌組和對照組的miR-27a基因型差異有統(tǒng)計學(xué)意義，GA基因型與GG基因型相比，經(jīng)調(diào)整年齡、BMI、絕經(jīng)狀態(tài)等因素后其調(diào)整的aOR=0.32，95％CI(0.12，0.85)，P=0.02，可以認為攜帶GA基因型是乳腺癌的保護因素。
　　結(jié)論：
　　miR-27a(rs11671784)在乳腺癌的發(fā)生中起作用，可作為乳腺癌新的分子生物標(biāo)志，探討乳腺癌遺傳易感性的可能機制。
　　第二部分:循環(huán)miR-182在乳腺癌診斷

10、中的作用。
　　目的：
　　為尋找乳腺癌診斷新的分子生物標(biāo)記物，研究血清miR-182在乳腺癌診斷中的作用。
　　方法：
　　應(yīng)用定量PCR檢測了46名乳腺癌患者和58名對照血清中miR-182的水平。
　　結(jié)果：
　　乳腺癌患者血清中的miR-182的水平高于健康對照組（P＜0.01）。雌激素受體ER陽性患者血清中miR-182水平明顯低于ER陰性患者，孕激素受體PR陽性患者血清中miR-182水平

11、也低于PR陰性患者。
　　結(jié)論：
　　血清miR-182在乳腺癌診斷中具有重要價值，為乳腺癌的診斷提供了一種新的分子標(biāo)記物。
　　第三部分:mi R-146a、miR-196a2和miR-499單核苷酸多態(tài)性與乳腺癌易感性的meta分析。
　　目的：
　　關(guān)于microRNA基因SNP與乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險研究由于研究對象、研究設(shè)計等方面不同，即使針對相同microRNA基因SNP與乳腺癌的研究結(jié)果也不全相同，

12、而且單個研究的樣本數(shù)量相對較小，抽樣誤差相對較大。按照meta分析的要求及過程，進行miR-146a、miR-196a2和miR-499的SNPs與乳腺癌易感性的meta分析，增大樣本含量，提高檢驗效能，得到更加真實可靠的結(jié)論，有助于從基因水平更好地認識乳腺癌的易感性，開展乳腺癌的預(yù)防工作。
　　方法：
　　通過計算機檢索PubMed和Embase等數(shù)據(jù)庫，并輔以追蹤參考文獻的方法，收集2009年1月至2013年1月公開發(fā)表

13、的相關(guān)病例對照研究，按照meta分析的基本步驟進行分析。
　　結(jié)果：
　　miR-146a/rs2910164與乳腺癌易感性的文獻經(jīng)篩選評價后共6項研究，累計4225例乳腺癌患者和4469例對照者，各基因型相比均無統(tǒng)計學(xué)意義。miR-196a2/rs11614913與乳腺癌易感性的文獻經(jīng)篩選評價后共8項研究，累計有4110例乳腺癌患者和5100例對照者，剔除2項不符合HWE研究后，TT+CT基因型與CC基因型相比較，OR=0

14、.906，95％CI(0.825，0.995)，P=0.039，有統(tǒng)計學(xué)意義，其它各基因型相比均無統(tǒng)計學(xué)意義。miR-499/rs3746444與乳腺癌易感性的文獻經(jīng)篩選評價后共3項研究，累計有2588例乳腺癌患者和3260例對照者，各基因型相比均無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　有關(guān)microRNA基因SNP與乳腺癌易感性的原始研究相對較少，現(xiàn)有研究表明miR-196a2/rs11614913在乳腺癌發(fā)生和診斷中具有重要意義

15、，為乳腺癌的預(yù)防提供了科學(xué)資料。
　　本研究的創(chuàng)新點：
　　1、以中國漢族人群為研究對象，檢測了乳腺癌患者和對照人群miR-27a基因SNP(rs11671784)的分布情況，研究發(fā)現(xiàn)與GG基因型相比，攜帶GA基因型是乳腺癌的保護因素，為乳腺癌的預(yù)防提供了科學(xué)依據(jù)。
　　2、以中國漢族人群為研究對象，檢測了乳腺癌患者和對照人群血清miR-182的水平，研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者血清中的miR-182的水平明顯高于對照組，為乳腺