CHIP在乳腺癌中的作用及其機(jī)制的探討.pdf

1、目的:探究E3泛素化連接酶CHIP在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其作用機(jī)制。
　　方法:采用腺病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)，將構(gòu)建的含GFP的高表達(dá)人源CHIP基因載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)入三陰性乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231細(xì)胞，建立MDA-MB-231高表達(dá)CHIP模型，通過xCELLigence系統(tǒng)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)MDA-MB-231細(xì)胞高表達(dá)CHIP后細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移以及侵襲等生物學(xué)行為的影響，用流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測(cè)高表達(dá)CHIP對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞周期的影響

2、，采用Tunel法、Ki-67法檢測(cè)高表達(dá)CHIP對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖的影響。采用qRT-PCR及Western blot技術(shù)檢測(cè)MDA-MB-231細(xì)胞高表達(dá)CHIP后Bcl-2、NF-κB、AKT、MMP等信號(hào)通路家族成員mRNA及蛋白水平的變化。采用免疫組化法觀察乳腺癌臨床標(biāo)本CHIP的表達(dá)情況，并對(duì)其與臨床病理特征和分子分型的關(guān)系加以分析。
　　結(jié)果:研究發(fā)現(xiàn)相比激素陽(yáng)性細(xì)胞MCF-7和ERBB2陽(yáng)性細(xì)

3、胞SK-BR3，CHIP在三陰性乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-231中 mRNA及蛋白水平均為最低。成功地建立了MDA-MB-231-ctrl（簡(jiǎn)稱為MDA-ctrl）和MDA-MB-231-hCHIP（簡(jiǎn)稱為MDA-hCHIP）穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。MDA-ctrl和MDA-hCHIP兩株細(xì)胞在細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞周期上并未顯示出明顯地差異性。MDA-MB-231高表達(dá)CHIP后凋亡減少，增殖降低?？沟蛲龌駼cl-xl、Bcl-2和A20 mRNA水平

4、在MDA-hCHIP細(xì)胞中明顯上調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。MDA-MB-231高表達(dá)CHIP后Bcl-xl、Bcl-2蛋白顯著上調(diào)。p-c-Raf和p-GSK-3β蛋白在MDA-MB-231高表達(dá)CHIP后顯著下調(diào)。RelA在MDA-hCHIP胞核蛋白中顯著下調(diào)，IKKβ在MDA-hCHIP全蛋白中顯著下調(diào)。MDA-MB-231高表達(dá)CHIP后抑制了細(xì)胞的侵襲能力，MDA-hCHIP細(xì)胞的MMP2及MMP9的活性明顯低于M

5、DA-ctrl細(xì)胞。乳腺癌組織中CHIP表達(dá)的陽(yáng)性率為60.16％，臨床分期Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌患者標(biāo)本中CHIP蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率43.24%顯著低于Ⅰ、Ⅱ期CHIP蛋白表達(dá)陽(yáng)性率67.03%，且在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者標(biāo)本中，CHIP呈相對(duì)低表達(dá)，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；另外，隨著乳腺癌分子分型復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)度增加，CHIP陽(yáng)性率呈降低趨勢(shì)，兩者呈負(fù)相關(guān)，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:在MDA-MB-2