靈芝多糖預防HDF衰老模型細胞p16、Cyclin D-,1-、CDK4、Rb表達變化作用的研究.pdf

1、目的：探討靈芝多糖對抗H2O2誘導的HDF細胞衰老作用及其可能的細胞周期調控機制。 方法：將HDF細胞培養(yǎng)至24代時分成六組：即青年組、對照組、衰老組(H2O2衰老模型組)，靈芝多糖小劑量(50mg/L)、中劑量(100mg/L)和高劑量(150mg/L)組。進行體外常規(guī)培養(yǎng)，各靈芝多糖組細胞從24代開始加靈芝多糖。各靈芝多糖組和衰老組自30代開始每2代加50μlH2O2，直至培養(yǎng)到38代。觀察細胞形態(tài)，采用MTT法檢測細胞活力

2、；免疫組化法檢測β-半乳糖苷酶活性；RT-PCR法檢測P16INK4a(P16)、cyclinD1、CDK4的表達;采用westernblot法檢測Rb蛋白表達和磷酸化Rb。 結果：與青年組及對照組細胞比較，衰老組細胞活力下降，β-半乳糖苷酶活性升高，cyclinD1mRNA表達升高(p＜0.01)，CDK4mRNA表達下降(p＜0.01)，P16蛋白表達升高(p＜0.01)，Rb磷酸化減少(p＜0.01)；與衰老組細胞比較，中