黨參多糖對D-半乳糖致衰老小鼠皮膚抗氧化作用及基因表達譜的影響.pdf

1、目的:本實驗的目的是觀察黨參多糖對D-半乳糖致衰老小鼠皮膚組織氧化損傷以及基因表達譜的的影響,探討黨參多糖是否能延緩小鼠皮膚衰老及其分子生物學機制,并進一步探求營衛(wèi)氣虛衰老理論與氧化自由基學說之間的內在聯系。
　　方法:將2月齡昆明種雄性小鼠120只隨機分成空白對照組、衰老模型組、黨參多糖低劑量組、黨參多糖高劑量組和維生素E組;采用D-半乳糖構建衰老小鼠模型,在造模的第11天起開始進行藥物干預;給藥32天后取材進行指標檢測,包括皮

2、膚一般形態(tài)學觀察,測定皮膚組織中SOD活性、ATP酶活性、MDA含量、LF含量、HYP含量,以觀察黨參多糖對D-半乳糖致衰老模型小鼠皮膚組織形態(tài)及抗氧化能力的影響;應用小鼠全基因組基因芯片技術篩選出黨參多糖作用后小鼠皮膚組織中具有顯著性表達差異的基因,并分別應用GO數據庫、NCBI數據庫和KEGG數據庫對具有顯著性表達差異的基因進行功能分析和信號通路分析;應用RT-PCR技術對基因芯片結果進行驗證,檢驗結果是否真實有效。
　　結果

3、:
　　(1)皮膚組織病理切片觀察結果:與空白對照組比較,衰老模型組小鼠皮膚組織光鏡下可見表皮變薄,皮膚附屬器及真皮膠原纖維含量明顯減少;與衰老模型組比較,黨參多糖低、高劑量組及維生素E組小鼠皮膚附屬器增加,膠原纖維含量增加且排列較致密。電鏡下可見衰老模型組小鼠成纖維細胞核異染色質增多,胞質很少,擴張的粗面內質網及脂褐素顆粒明顯增多,膠原纖維減少;黨參多糖高劑量組及維生素E組小鼠皮膚細胞粗面內質網無擴張,脂褐素顆粒減少,膠原纖維數

4、量增加;黨參多糖低劑量組小鼠皮膚細胞內質網輕度擴張,但膠原纖維明顯增加。
　　(2)黨參多糖對衰老小鼠皮膚抗氧化能力相關指標的影響:與空白對照組比較,衰老模型組小鼠皮膚組織SOD活性下降(P<0.05),ATP酶活力下降(P<0.05),MDA及LF含量顯著增高(P<0.05),HYP含量顯著減少(P<0.05);與衰老模型組比較,黨參多糖高劑量組小鼠皮膚組織 SOD活性顯著增高(P<0.05),ATP酶活性顯著增高(P<0.05

5、)、MDA及LF含量顯著減少(P<0.05),HYP含量顯著增高(P<0.05);與維生素E組比較,黨參多糖高劑量組小鼠皮膚組織SOD、ATP酶活性、MDA及HYP含量值無明顯差異(P>0.05),黨參多糖低劑量組介于維生素E組和衰老模型組之間。
　　(3)黨參多糖對衰老模型小鼠皮膚基因表達的影響:黨參多糖干預后衰老模型小鼠皮膚組織中有顯著性表達差異的基因共有118個,其中85個上調,33個下調,主要涉及的功能包括物質代謝、細胞凋

6、亡、免疫應答、氧化應激、DNA損傷、蛋白修飾、基因轉錄、皮膚形態(tài)等方面;應用KEGG數據庫分析經黨參多糖作用后顯著改變的信號通路,共篩選出6條活性發(fā)生顯著性改變的信號通路,其中5條上調,1條下調。上調的通路中,差異顯著性位于第一位和第二位的是分別與皮膚膠原纖維形成密切相關的ECM信號通路和與皮膚形態(tài)密切相關的Focal信號通路。
　　(4)RT-PCR實驗結果證明所驗證的基因與基因芯片的結果相吻合,其上調或下調的趨勢一致,說明基因

7、芯片的結果真實可靠,能準確地反映各組小鼠基因表達的水平。
　　結論:
　　(1)本研究結果表明黨參多糖能通過改善D-半乳糖致衰老模型小鼠皮膚組織的病理形態(tài),增強抗氧化能力及增加膠原蛋白含量來延緩皮膚衰老。
　　(2)黨參多糖能通過調節(jié)小鼠皮膚組織中多個基因及多條信號通路的活性發(fā)揮延緩皮膚衰老的作用,揭示了黨參多糖是通過多靶點、多途徑來延緩小鼠皮膚衰老的。
　　(3)補益營衛(wèi)能夠延緩小鼠皮膚衰老,中醫(yī)營衛(wèi)氣虛衰老理