核苷酸抗氧化作用及其對(duì)小鼠相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、核苷酸通常被認(rèn)為是一種條件型營養(yǎng)素，在特定的條件下發(fā)揮重要作用。本研究旨在探討其本身可能存在的清除自由基的能力及其抗氧化特性，進(jìn)一步揭示核苷酸的作用機(jī)制，擴(kuò)大核苷酸應(yīng)用的理論和實(shí)踐基礎(chǔ)。 本試驗(yàn)采用化學(xué)比色法測定四種核苷酸清除羥自由基、DPPH自由基和超氧陰離子自由基的能力；采用流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法建立了評(píng)價(jià)四種核苷酸(5'-AMP、5'-CMP、5'-GMP、5'-UMP)體外抗氧化、清除自由基能力的方法。堿性條件下鄰苯三酚產(chǎn)

2、生的超氧離子自由基能誘導(dǎo)增強(qiáng)魯米諾化學(xué)發(fā)光，核苷酸對(duì)超氧陰離子自由基可能具有清除作用，因而，在魯米諾發(fā)光體系中加入核苷酸可能會(huì)抑制魯米諾化學(xué)發(fā)光；建立H2O2氧化損傷體外培養(yǎng)脾細(xì)胞和肝細(xì)胞的模型，用MTT法檢測核苷酸的修復(fù)作用，并分析了其對(duì)細(xì)胞抗氧化體系及抗氧化能力的影響；同時(shí)采用斷奶后的雄性小鼠，分別飼喂添加0、0.25％核苷酸水平的基礎(chǔ)日糧15天，對(duì)照組灌胃生理鹽水，實(shí)驗(yàn)組灌胃CpGDNA，4h后比較基因表達(dá)的差異，借用基因芯片技術(shù)

3、，對(duì)核苷酸抗氧化作用的相關(guān)基因進(jìn)行了研究。 試驗(yàn)結(jié)果表明，核苷酸具有劑量依賴性的體外抗氧化和清除活性氧能力，核苷酸的羥自由基清除能力很高，尤其是5'-磷酸腺苷(5'-AMP)和5'-磷酸胞苷(5'-CMP)清除羥自由基的能力分別相當(dāng)于維生素C(Vc)的0.75倍。相對(duì)的，核苷酸的DPPH自由基的清除能力比較弱。四種核苷酸均能有效的抑制化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，并且隨著核苷酸濃度的升高，抑制率增強(qiáng)。細(xì)胞體外培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明，添加核苷酸均能修

4、復(fù)H2O2誘導(dǎo)的脾細(xì)胞氧化損傷，修復(fù)作用與濃度呈正比，濃度達(dá)到一定高度時(shí)修復(fù)均顯著(P<0.01)，能顯著提高總抗氧化能力和抗氧化酶類活力(P<0.01)，顯著降低MDA含量(P<0.01)。受損細(xì)胞的培養(yǎng)液中添加核苷酸能使其細(xì)胞培養(yǎng)液的氧自由基(ROS)水平逐漸降低，核苷酸添加量為10mmol/L時(shí)，ROS水平接近對(duì)照組水平，說明其具有顯著的抗氧化作用。Affymetrix芯片顯示CpGDNA刺激導(dǎo)致小鼠的物質(zhì)能量代謝、抗氧化酶類等基