紅車軸草總黃酮抗氧化作用及其對(duì)免疫功能的影響.pdf

1、紅車軸草(Trifolium pratense L.)為豆科多年生草本植物，是我國(guó)主要的牧草植物之一。紅車軸草含有黃酮類、蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類和維生素等多種成分，其中黃酮類物質(zhì)總含量約占干重的2％。黃酮類物質(zhì)中的異黃酮主要是鷹嘴豆芽素A(Biochanin A)、芒柄花素(Formononetin)、染料木素(Genistein)和大豆黃素(Daidzein)等4種，研究證明紅車軸草異黃酮具有弱的雌激素樣作用和促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、抑制癌細(xì)胞的

2、生長(zhǎng)及改善動(dòng)脈血管的柔軟性等多種生理功能，但對(duì)其抗氧化活性及對(duì)機(jī)體免疫功能的影響研究較少。因此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)紅車軸草總黃酮的抗氧化作用以及對(duì)機(jī)體免疫功能的影響進(jìn)行了研究。 應(yīng)用超聲一微波協(xié)同萃取技術(shù)，用80％乙醇做溶媒，提取紅車軸草總黃酮。采用Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基(·OH)、鄰苯三酚自氧化產(chǎn)生超氧陰離子(O2-)模型，檢測(cè)紅車軸草總黃酮體外清除自由基的作用；采用分光光度法測(cè)定H2O2誘導(dǎo)紅細(xì)胞溶血作用，用硫代巴比妥酸(TBA

3、)法測(cè)定小鼠紅細(xì)胞膜脂質(zhì)及肝組織勻漿脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量；通過遲發(fā)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)、炭粒廓清試驗(yàn)、免疫器官臟器指數(shù)試驗(yàn)研究紅車軸草總黃酮對(duì)小鼠免疫功能的影響。研究結(jié)果如下： 1.紅車軸草總黃酮在6.25～200 mg/mL范圍內(nèi)具有清除Fenton反應(yīng)產(chǎn)生·OH的作用，在6.25～100 mg/mL濃度范圍內(nèi)對(duì)鄰苯三酚自氧化產(chǎn)生的O2-具有清除作用，直線回歸方程分別為Y=18.699+0.395X(r2=0.843)，

4、Y=13.82+0.663X(r2=0.997)，表明二者均呈明顯的量效關(guān)系，其對(duì)·OH(IC50)和對(duì)O2-半數(shù)清除濃度(IC50)分別為44.06 mg/mL和54.57mg/mL。表明紅車軸草總黃酮體外具有較好的清除自由基作用。 2.紅車軸草總黃酮在0.025～0.2 mg/mL范圍內(nèi)能抑制H2O2誘導(dǎo)紅細(xì)胞溶血和紅細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化作用，直線回歸方程分別為Y=12.393+322.661X(P<0.05，r=0.970，r

5、2=0.942)、Y=21.284+249.84.7X(r=0.989，r2=0.978)，IC50分別為0.0910 mg/mL和0.0905 mg/mL，均表現(xiàn)較好的量效關(guān)系；紅車軸草總黃酮在0.10～0.78 mg/mL范圍內(nèi)可以抑制肝組織脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的形成，曲線擬合Y=76.472-4.628/X(r2=0.990)，IC50為0.174 mg/mL。表明紅車軸草總黃酮體外具有明顯的抗氧化作用。 3.以小鼠遲發(fā)變態(tài)反應(yīng)

6、試驗(yàn)、炭粒廓清試驗(yàn)、免疫器官臟器指數(shù)試驗(yàn)，測(cè)定紅車軸草總黃酮對(duì)免疫功能的影響。結(jié)果表明，隨著紅車軸草總黃酮濃度的增大，小鼠足跖增厚逐漸增加，與對(duì)照組比以50 mg/mL濃度組增加顯著(p<0.05)；小鼠炭粒廓清試驗(yàn)表明，50 mg/ml和20 mg/ml濃度組與對(duì)照組比較均能顯著增強(qiáng)小鼠炭粒廓清能力(P<0.05)；脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)隨著紅車軸草總黃酮濃度的增大有增加的趨勢(shì)，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。說明紅車軸草總黃酮在適宜濃