中藥有效成分干預對D-半乳糖致衰老小鼠學習記憶能力及海馬神經(jīng)發(fā)生的影響.pdf

1、目的:對D-半乳糖（D-galactose,D-gal）誘導的衰老小鼠分別進行丹參注射液、丹酚酸B、肉蓯蓉總苷、人參皂苷Rg1的干預，以VE干預作為陽性對照，D-gal模型小鼠為陰性對照，通過檢測各組小鼠學習記憶能力的改變、海馬細胞增殖和神經(jīng)干細胞分化的差異、機體整體及海馬組織局部抗氧化能力和氧化損傷的情況以及小鼠海馬組織神經(jīng)因子的含量，觀察中藥有效成分干預對D-gal誘導的衰老模型小鼠學習記憶能力及神經(jīng)發(fā)生的影響。
　　方法:<

2、br>　　1.在丹參注射液對D-半乳糖致衰老小鼠學習記憶能力的影響實驗中，將2-3月齡雄性BALB/c小鼠隨機分為3組：A.對照組；B.模型組；C.丹參作用組。每組8只。皮下注射D-gal42天構建衰老模型，模型組與丹參作用組于第15天開始分別腹腔注射生理鹽水和丹參注射液。第43天行水迷宮測試，并于24h之后取血清和海馬組織，分別檢測小鼠血清和海馬組織勻漿上清超氧化為歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）活力和丙二醛

3、（Methylene dioxyamphetamine，MDA）水平，評估各組小鼠抗氧化能力及氧化損傷程度。
　　2.在丹酚酸B、肉蓯蓉總苷對D-半乳糖致衰老小鼠學習記憶能力及海馬神經(jīng)發(fā)生的影響實驗中：將3月齡Nestin-GFP小鼠隨機分為7組：A.對照組；B.模型組；C.丹酚酸B低劑量組；D.丹酚酸B高劑量組；E.肉蓯蓉總苷低劑量組；F.肉蓯蓉總苷高劑量組；G.VE組，每組6只。皮下注射D-gal42天構建衰老模型，各用藥組于

4、第15天開始同時腹腔注射相應藥物。第43天行水迷宮測試，并在24h后每組取6只分離血清和海馬組織（矢狀分成兩個半腦，右側半腦分離海馬組織，左側置于液氮中保存），分別檢測小鼠血清和海馬組織勻漿上清SOD活力和MDA水平；測定小鼠海馬內腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（Brain derived neurophic factor，BDNF）和神經(jīng)膠質細胞源性營養(yǎng)因子（Glial cell line-Derived Neurotrophic Factor，

5、GDNF）含量；取凍存的左側半腦，行連續(xù)冰凍切片，采用免疫熒光染色法觀察小鼠海馬組織細胞增殖和神經(jīng)干細胞的分化情況。
　　3.在人參皂苷Rg1、肉蓯蓉總苷對D-半乳糖致衰老小鼠學習記憶能力減退及神經(jīng)發(fā)生下降的治療作用實驗中：將2.5-3月齡Nestin-GFP小鼠隨機分為5組：A.對照組；B.模型組；C.人參皂苷Rg1組；D.肉蓯蓉總苷組；E.VE組。每組6只。腹腔注射D-gal42天構建衰老模型，各用藥組于第43天開始腹腔注射相

6、應藥物，第72天行水迷宮測試，并在24h后每組取6只分離血清和海馬組織（矢狀分成兩個半腦，右側半腦分離海馬組織，左側置于液氮中保存），分別檢測小鼠血清和海馬組織勻漿上清SOD活力和MDA水平；測定小鼠海馬內BDNF和GDNF含量；取凍存的左側半腦，行連續(xù)冰凍切片，采用免疫熒光染色法觀察小鼠海馬組織細胞增殖和神經(jīng)干細胞的分化情況。
　　結果:
　　1.在丹參注射液對D-半乳糖致衰老小鼠學習記憶能力的影響實驗中：與對照組相比，模

7、型組小鼠①逃避潛伏期明顯延長，穿越平臺次數(shù)減少（P<0.05）；②小鼠血清和海馬組織SOD活力下降，MDA含量增加（P<0.01）。與模型組相比，丹參作用組①小鼠的穿越平臺次數(shù)有所增加，逃避潛伏期明顯縮短（P<0.05）；②血清和海馬組織SOD升高，MDA含量下降（P<0.05）。
　　2．在丹酚酸B、肉蓯蓉總苷對D-半乳糖致衰老小鼠學習記憶能力及海馬神經(jīng)發(fā)生的影響實驗中：與對照組相比，模型組小鼠①逃避潛伏期明顯延長，穿越平臺次數(shù)

8、減少（P<0.05）；②血清和海馬組織SOD活力下降，MDA含量增加（P<0.05）；③海馬SGZ Nestin+細胞、PCNA+細胞、DCX+細胞、DG區(qū)β-Ⅲtubulin+細胞數(shù)量有所下降，SGZ GFAP+細胞的數(shù)量有所增加（P<0.05）；④海馬組織中BDNF、GDNF的含量有所下降（P<0.05）。與模型組比較，丹酚酸B、肉蓯蓉總苷干預后①小鼠穿越平臺次數(shù)有所增加，逃避潛伏期時間明顯縮短（P<0.05）；②血清和海馬組織的S

9、OD活力升高，MDA含量下降（P<0.05）；③海馬SGZ Nestin+細胞、PCNA+細胞、DCX+細胞、β-Ⅲtubulin+細胞數(shù)量與模型組相比有明顯增加，而GFAP+細胞數(shù)量減少（P<0.05）；④海馬組織中BDNF、GDNF的含量增加（P<0.05）。
　　3．在人參皂苷Rg1、肉蓯蓉總苷對D-半乳糖致衰老小鼠學習記憶能力減退及神經(jīng)發(fā)生下降的治療作用實驗中：與對照組相比，模型組小鼠①逃避潛伏期明顯延長，小鼠穿越平臺次數(shù)

10、減少（P<0.05）；②血清和海馬組織SOD活力下降，MDA含量增加（P<0.05）；③海馬SGZ Nestin+細胞、PCNA+細胞、DCX+細胞、DG區(qū)β-Ⅲtubulin+細胞數(shù)量減少（P<0.05），SGZ GFAP+細胞數(shù)量明顯增加（P<0.05）；④海馬組織中BDNF、GDNF含量明顯下降（P<0.05）。而與模型組比較，人參皂苷Rg1和肉蓯蓉總苷治療后小鼠①穿越平臺次數(shù)與模型組相比有有所增加，但無明顯差異，而逃避潛伏期時間

11、較模型組明顯縮短（P<0.05）；②小鼠血清和海馬組織中SOD活力升高，MDA含量下降（P<0.05）；③小鼠海馬SGZ Nestin+細胞、PCNA+細胞、DCX+細胞、β-Ⅲtubulin+細胞數(shù)量明顯增加，而GFAP+細胞數(shù)量明顯減少（P<0.05）；④小鼠海馬組織中BDNF、GDNF的含量增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結論:
　　1.丹參注射液具有提高衰老小鼠學習記憶能力，其機制可能與清除自由基能力、

12、維持機體內環(huán)境自由基平衡有關。
　　2.丹酚酸B、肉蓯蓉總苷對D-gal衰老模型小鼠的預防性給藥能改善衰老小鼠學習記憶能力的減退。其機制可能與其提高機體抗氧化能力、清除自由基維持機體內環(huán)境平衡和促進腦內神經(jīng)營養(yǎng)因子的分泌從而維持、促進神經(jīng)發(fā)生有關。
　　3.人參皂苷 Rg1和肉蓯蓉總苷對衰老模型小鼠的治療性給藥能改善衰老期的學習記憶功能減退。其機制可能與提高衰老機體的抗氧化能力、清除機體自由基，調節(jié)神經(jīng)干細胞微環(huán)境相關因子的