對映-貝殼杉烷類二萜化合物抗腫瘤活性的研究.pdf

1、天然產(chǎn)物是藥物和藥物先導(dǎo)化合物的重要來源。國內(nèi)外已有很多研究證明，唇形科香茶菜屬對映-貝殼杉烷類二萜化合物具有廣泛的生物活性，其中以抗腫瘤和抗炎的作用最為顯著。既往的研究表明，對映-貝殼杉烷類二萜化合物通過誘導(dǎo)細胞凋亡和抑制細胞周期來發(fā)揮抗腫瘤作用。而具體的抗腫瘤作用機制和靶點還不明確。因此為了能更好的評價其臨床應(yīng)用前景還需要更加深入和全面的研究。
　　本研究首先通過MTT分析法分析了7種對映-貝殼杉烷類化合物對鼻咽癌細胞株增殖能

2、力的影響，并計算出IC50值進行構(gòu)效活性分析。這7種化合物均具有較好的抗腫瘤活性。這可能由于它們具有一個相同的活性基團α-亞甲基環(huán)戊酮結(jié)構(gòu)。不同位置的取代基又明顯影響這類化合物的抗腫瘤活性。然后我們篩選出了一種對映-貝殼杉烷類化合物（longikaurin A）研究其誘導(dǎo)鼻咽癌細胞株CNE1、CNE2凋亡的機制。
　　針對longikaurin A這個化合物，我們進行MTT實驗檢測其增殖抑制的濃度-時間效應(yīng)。平板克隆形成實驗分析其

3、低濃度長時間干預(yù)是否同樣抑制細胞增殖和細胞存活。流式細胞學(xué)技術(shù)檢測這個化合物誘導(dǎo)細胞凋亡和周期抑制。Western Blotting法檢測線粒體依賴的細胞凋亡通路。建立裸鼠符合瘤模型，分析該化合物體內(nèi)抗腫瘤活性。
　　實驗結(jié)果：這7種化合物均對鼻咽癌細胞株有不同程度的生長抑制作用。α-亞甲基環(huán)戊酮結(jié)構(gòu)是這類化合物共有的抗腫瘤活性基團，在抗腫瘤活性中起最主要的作用。不同的取代基和不同位置的取代基均會影響這類化合物的抗腫瘤活性：C-1

4、，C-11位的-OH基會使這類化合物的細胞毒性減弱。C-11位的-OAC可使其活性增強。C-1位的-OH被氧化成=O基也可使這類化合物的細胞毒性增強。流式細胞學(xué)分析發(fā)現(xiàn)longikaurin A通過誘導(dǎo)細胞凋亡和周期抑制來抑制細胞增殖。Longikaurin A可上調(diào)促凋亡蛋白Bax和下調(diào)Bcl-xL的表達水平，Bax/Bcl-xl的值也呈濃度依賴性升高。這些可能促使線粒體膜電位(△Ψm)和caspase激活，最終導(dǎo)致DAN的裂解產(chǎn)生凋

5、亡。Caspase廣譜抑制劑Z-VAD-FMK可以完全阻斷l(xiāng)ongikaurin A引起的細胞凋亡。另外我們通過流式細胞儀發(fā)現(xiàn)低濃度的longikaurin A還可能會將腫瘤細胞阻滯在S期。在裸鼠負荷瘤實驗中，longikaurin A可以顯著的抑制腫瘤的生長，其效果并不亞于臨床常用化療藥物紫杉醇，而且并沒有顯示出更強的近期毒性反應(yīng)。
　　綜上所述，含a-亞甲基環(huán)戊酮結(jié)構(gòu)單元的對映-貝殼杉烷類二萜化合物均具有抗腫瘤活性。a-亞甲基