鹵地菊中對(duì)映貝殼杉型二萜衍生物的抗腫瘤作用.pdf

1、目的：對(duì)鹵地菊中對(duì)映貝殼杉型二萜成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，并對(duì)修飾后的衍生物進(jìn)行體內(nèi)外抗腫瘤作用的研究及其機(jī)制的初步探討，以期發(fā)現(xiàn)活性高、毒副作用小的先導(dǎo)化合物。
　　方法：（1）選擇含量高的對(duì)映-貝殼杉-16-烯-19-酸（W1）化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，向分子中引入α-環(huán)外亞甲基環(huán)戊酮基團(tuán)，對(duì)C-4位羧基引入酰胺基團(tuán)。（2）分別用MTT和SRB法檢測(cè)15-羰基-對(duì)映-貝殼杉-16-烯-19-丁酰胺化合物（W1-6）對(duì)2株白血病細(xì)胞和6株貼壁

2、生長(zhǎng)腫瘤細(xì)胞的體外增殖作用；選擇結(jié)腸癌SW480細(xì)胞，用吖啶橙染色觀察藥物作用后的細(xì)胞形態(tài)；分別用PI單染法和Anne xin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)W1-6對(duì)細(xì)胞周期和凋亡的影響；Western-blot檢測(cè)W1-6對(duì)細(xì)胞內(nèi)Bcl-2及Caspase-3蛋白表達(dá)的影響。（3）應(yīng)用小鼠移植瘤U14模型，觀察W1-6的體內(nèi)抗腫瘤活性。
　　結(jié)果：（1）W1結(jié)構(gòu)改造后，合成了具有α-亞甲基酮結(jié)構(gòu)的新型對(duì)映貝殼杉二萜化合物W1-6

3、：15-羰基-對(duì)映-貝殼杉-16-烯-19-丁酰胺。（2）體外試驗(yàn)結(jié)果顯示，W1-6對(duì)8株腫瘤細(xì)胞具有顯著的濃度依賴性抑制增殖作用，IC50值均在0.88 mg·L-1以內(nèi)。（3）動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果顯示，W1-6對(duì)U14移植瘤的增長(zhǎng)有一定的抑制作用，在劑量為30、15、7.5 mg·(kg·d)-1時(shí)，抑制率分別為35.07％、10.23%和28.62%。（4）對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的試驗(yàn)結(jié)果顯示，W1-6對(duì)細(xì)胞的抑制作用呈明顯的濃度依賴性和

4、時(shí)間依賴性。作用24、48、72 h的IC50分別為0.86、0.40和0.19 mg·L-1。（5）細(xì)胞周期分析顯示，SW480細(xì)胞經(jīng)W1-6作用24 h后，細(xì)胞被阻滯在S期，在濃度0、0.25、0.5、1.00 mg·L-1時(shí)，S期細(xì)胞由陰性對(duì)照組的27.92%分別提高至37.92%、47.65%和52.91%。各給藥濃度組與對(duì)照組比較具有顯著的差異性（P<0.01）。（6）吖啶橙染色結(jié)果顯示，經(jīng)W1-6作用后的SW480細(xì)胞數(shù)目減

5、少，可見(jiàn)綠色碎片顆粒，核染色質(zhì)濃縮，并形成凋亡小體（。7）Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)結(jié)果顯示，不同濃度W1-6（0、0.25、0.5、1.00 mg·L-1）作用24 h后， SW480細(xì)胞早期凋亡率分別為1.2%、6.9%、7.4%、9.3%，晚期凋亡率分別為8.5%、8.0%、10.1%、18.8%。與對(duì)照組比較，各給藥濃度組早期凋亡率差異具有顯著性（P<0.01），1.00 mg·L-1濃度組的晚期凋亡率也有差異

6、性（P<0.05）。（8）Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示，在W1-6作用24h后，隨著藥物濃度的增加，SW480細(xì)胞內(nèi)Bcl-2的表達(dá)量逐漸減少，而Cleaved Caspase-3的表達(dá)量逐漸增加。
　　結(jié)論：實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)對(duì)映貝殼杉二萜化合物W1的結(jié)構(gòu)修飾，得到具有α-亞甲基環(huán)戊酮的新型對(duì)映貝殼杉二萜衍生物W1-6；試驗(yàn)結(jié)果顯示，W1-6具有顯著的體外抗腫瘤作用，且具有一定的體內(nèi)抗腫瘤活性；抗腫瘤機(jī)制的初步探討顯示，其作用機(jī)