安徽半枝蓮中新克羅烷型二萜化合物的發(fā)現(xiàn)及抗腫瘤活性研究.pdf

1、半枝蓮為唇形科植物半枝蓮Scutellaria barbarta D.Don的全草及根，又名狹葉韓信草、并頭草、四方馬蘭等，產(chǎn)于江蘇、浙江、安徽、福建、廣東、廣西、山西、陜西、云南等地。自1985版以來，歷版《中華人民共和國(guó)藥典》一部對(duì)其均有收載，認(rèn)為其性辛、苦、寒，歸肺、肝、腎經(jīng)，功能主治為清熱解毒、化瘀利尿，用于疔瘡腫毒，咽喉腫痛、跌撲傷痛、水腫、黃疸、蛇蟲咬傷等。
　　 目前從半枝蓮全草中分離純化出多種化學(xué)成分，主要是一些

2、黃酮、多糖和二萜類化合物，另外還有人從中分離出一些生物堿以及甾體類。其中黃酮類成分以野黃芩苷為代表，在2010年版《中國(guó)藥典》中作為指標(biāo)成分列入半枝蓮的質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。半枝蓮中的多糖以SPSⅠ、SPSⅡ居多，其基本構(gòu)成單元是阿拉伯糖、鼠李糖、核糖、木糖、甘露糖、果糖、半乳糖、葡萄糖等，多以β-型糖苷鍵連接，糖環(huán)也多以β-吡喃環(huán)的形式存在。二萜類化合物是半枝蓮化學(xué)成分研究的一個(gè)新熱點(diǎn)，目前文獻(xiàn)報(bào)道從半枝蓮中分離出多個(gè)二萜類成分，如半枝蓮二萜

3、A～Ⅰ以及半枝蓮內(nèi)酯A、B、C、D等。
　　 現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，半枝蓮的水提取物和醇提取物均有明顯的抗肺癌、消化系統(tǒng)癌、乳腺癌、絨膜上皮癌的活性，其活性的物質(zhì)基礎(chǔ)研究一度集中于在藥材中含量較高的多糖、黃酮類成分上，并發(fā)現(xiàn)這些成分確實(shí)具有一定的抗腫瘤活性。但從已有的研究結(jié)果看，這些成分的抗腫瘤活性較弱，不足以代表半枝蓮粗提物的臨床表現(xiàn)，因此研究者將目光轉(zhuǎn)向在藥材中含量較低的成分上，其中包括一些二萜類成分。本論文的研究結(jié)果認(rèn)為，半

4、枝蓮中的主要抗腫瘤成分可能是其中的一些新克羅烷型二萜類化合物。
　　 有文獻(xiàn)報(bào)道，安徽產(chǎn)半枝蓮的高效液相色譜圖與我國(guó)其他地方產(chǎn)半枝蓮有較大差別，而迄今為止，有關(guān)安徽半枝蓮中新克羅烷型二萜的化學(xué)研究，尚未見有文獻(xiàn)報(bào)道。為此，本論文應(yīng)用硅膠、反相硅膠(ODS)及凝膠SephadexLH-20柱層析，并結(jié)合中壓液相(MPLC)、高壓液相(HPLC)及制備薄層(Preparative TLC)等手段，對(duì)產(chǎn)自我國(guó)安徽半枝蓮中的新克羅烷型二

5、萜化合物們進(jìn)行了系統(tǒng)化學(xué)研究，并對(duì)所制備的化合物單體進(jìn)行了抗腫瘤活性研究。
　　 本論文形成了以下研究成果：
　　 1：對(duì)安徽半枝蓮中新克羅烷型二萜類化合物進(jìn)行系統(tǒng)化學(xué)研究，獲得30個(gè)新克羅烷型二萜化合物單體并確定其結(jié)構(gòu)共分離得到30個(gè)新克羅烷型二萜單體，同時(shí)，依據(jù)化合物的理化特性，并結(jié)合波譜學(xué)技術(shù)(uv，IR，MS及NMR)，對(duì)所有30個(gè)二萜化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了確定，同時(shí)應(yīng)用ROESY技術(shù)對(duì)其相對(duì)構(gòu)型進(jìn)行了闡明。30個(gè)新

6、克羅烷型二萜化合物中，有6個(gè)二萜化合物為本研究發(fā)現(xiàn)的新化合物。30個(gè)新克羅烷型二萜化合物分別為：LB1(半枝蓮素C，Barbatin C)，LB2(半枝蓮生物堿C，Scutebarbatine C)，LB3(半枝蓮生物堿D，Scutebarbatine D)，LB4(半枝蓮生物堿E，Scutebarbatine E)，LB5(半枝蓮素D，Barbatin D)，LB6(半枝蓮素E，Barbatin E)，LB7(半枝蓮生物堿K，Scut

7、ebarbatine K)，LB8(半枝蓮生物堿L，Scutebarbatine L)，LB9(半枝蓮生物堿O，Scutebarbatine O)，LB10(半枝蓮生物堿B，Scutebarbatine B)，LB11(半枝蓮臨泉生物堿C，Scutelinquanine C)，LB12(6-乙酰氧基半枝蓮素C，6-Acetoxybarbatin C)，LB13(6-(2，3-環(huán)氧-2-異丙基)半枝蓮素C，6-(2，3-Epoxy-2-i

8、sopropyl-n-propoxyl)barbatin C)，LB14(半枝蓮素A，Barbatin A)，LB15(半枝蓮素B，Barbatin B)，LB16(半枝蓮生物堿GScutebarbatine G)，LB17(半枝蓮生物堿F，Scutebarbatine F)，LB18(6-煙酰氧基半枝蓮生物堿G，6-O-Nicotinoylscutebarbatine G)，LB19(6-煙酰氧基-7-乙酰氧基半枝蓮生物堿G，6-O-

9、Nicotinoyl-7-O-acetoxylscutebarbatine G)，LB20(6，7-2煙酰氧基半枝蓮生物堿G，6，7-Di-O-nicotinoylscutebarbatine G)，LB21(半枝蓮河南生物堿H，Scutehenanine H)，LB22(半枝蓮臨泉生物堿D，ScutelinquanineD)，LB23(半枝蓮臨泉生物堿A，Scutelinquanine A)，LB24(半枝蓮生物堿I，Scutebar

10、batine I)，LB25(半枝蓮生物堿J，Scutebarbatine J)，LB26(半枝蓮生物堿H，Scutebarbatine H)，LB27(7-煙酰氧基半枝蓮生物堿 H，7-O-Nicotinoylscutebarbatine H)，LB28(半枝蓮生物堿M，Scutebarbatine M)，LB29(半枝蓮生物堿N，Scutebarbatine N)，LB30(半枝蓮臨泉生物堿B，Scutelinquanine B)。

11、
　　 2：對(duì)所獲得的新克羅烷型二萜類化合物的抗腫瘤活性進(jìn)行評(píng)價(jià)并對(duì)部分化合物的抗腫瘤機(jī)制進(jìn)行了研究本研究中以鬼臼乙叉和順鉑為陽性對(duì)照藥，采用了MTT。法對(duì)所制備的30個(gè)新克羅烷型二萜化合物進(jìn)行了抗腫瘤活性評(píng)價(jià)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)30個(gè)二萜化合物對(duì)人鼻咽癌HONE-1細(xì)胞、口腔上皮癌KB細(xì)胞及結(jié)腸癌HT29細(xì)胞表現(xiàn)出良好的抑制作用，其半數(shù)抑制濃度(IC50)為2.0-8.1μM。鑒于半枝蓮二萜化合物良好的體外抗腫瘤活性，選擇相對(duì)含量高且結(jié)

12、構(gòu)新穎的半枝蓮生物堿B進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，同時(shí)進(jìn)行了抗人肺癌機(jī)制研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)半枝蓮生物堿B作用24小時(shí)后，可將藥物阻斷于G1期，S期細(xì)胞比例明顯減少，同時(shí)可明顯誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制肺癌細(xì)胞遷移、破壞肺癌細(xì)胞A549的應(yīng)力纖維的結(jié)構(gòu)。
　　 本論文的研究?jī)?nèi)容主要集中于半枝蓮中的新克羅烷型二萜化合物，包括其分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定與活性研究，在半枝蓮抗腫瘤活性的物質(zhì)基礎(chǔ)方面進(jìn)行了深入的探索，為擴(kuò)展半枝蓮這一傳統(tǒng)中藥的現(xiàn)代臨床應(yīng)用范圍提供了理論