不同微藻對(duì)縊蟶稚貝脂質(zhì)組成和揮發(fā)性風(fēng)味的影響研究及微藻揮發(fā)性物質(zhì)產(chǎn)生的分子生物學(xué)研究.pdf

1、縊蟶攝食海洋中的微藻，不同的微藻餌料所含脂類物質(zhì)與揮發(fā)性化合物可能對(duì)縊蟶脂質(zhì)和風(fēng)味產(chǎn)生影響。本研究利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）技術(shù)，對(duì)人工養(yǎng)殖中常用餌料微藻（角毛藻、球等鞭金藻、威氏海鏈藻、假微型海鏈藻）投喂的縊蟶稚貝后進(jìn)行脂肪酸、甾醇分析，結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)共檢測(cè)到16種脂肪酸和7種甾醇，不同的單種餌料及混合餌料的縊蟶投喂組的脂肪酸、甾醇差異很大。C16:2在含有威氏海鏈藻的單種餌料和混合餌料的投喂組被檢測(cè)到；金藻混合藻餌料的縊蟶

2、投喂組脂肪酸種類最豐富（13-15種），多不飽和脂肪酸（PUFA）百分含量最高，膽甾醇含量不高但富含菜子甾醇。從餌料微藻對(duì)縊蟶脂質(zhì)營(yíng)養(yǎng)組成的角度而言，金藻的混合餌料是縊蟶稚貝的最佳餌料。本研究還利用固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)（SPME-GC-MS）用技術(shù)，對(duì)投喂了不同餌料微藻（假微型海鏈藻、威氏海鏈藻、角毛藻、球等鞭金藻、青島大扁藻、云微藻）的縊蟶稚貝進(jìn)行肉質(zhì)風(fēng)味分析，研究不同微藻餌料對(duì)縊蟶稚貝肉質(zhì)風(fēng)味影響。研究發(fā)現(xiàn)：不同餌料投喂組的

3、縊蟶稚貝在揮發(fā)性化合物的種類和數(shù)量上存在差異，實(shí)驗(yàn)共檢測(cè)到71種化合物，其中醛、酮、烷烴種類最多（共43種），占總化合物種類60.56％，其中，醛類種類占總化合物種類的22.55%、酮類占21.12%、烷烴類占16.90%；此外，還有醇類、醚酯類化合物等，但其種類和百分含量均不高。3-甲基-正丁醛以61.37%-77.28%的高百分含量存在于假微型海鏈藻、威氏海鏈藻和角毛藻這三種硅藻餌料投喂組中，我們認(rèn)為3-甲基-正丁醛是影響硅藻投喂縊

4、蟶稚貝風(fēng)味的主要物質(zhì)；本研究還將縊蟶進(jìn)行高溫烹煮后進(jìn)行風(fēng)味物質(zhì)的比較，結(jié)果顯示：烹煮后的揮發(fā)性化合物共檢測(cè)到49種，仍以醛、酮、烷烴種類最多（共32種），占總化合物種類的65.31%。醇類化合物種類數(shù)量呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)，烹煮后不飽和醇類如3-戊烯醇、3-羥基-1-辛烯醇等均無(wú)法檢測(cè)到；酮類化合物種類也呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，烹煮后烯酮類如1-戊烯-3-酮、3-辛烯酮等化合物均無(wú)法檢測(cè)到，二酮類化合物種類呈上升趨勢(shì)，如戊二酮、己二酮、辛二酮等。醛類化

5、合物的總百分含量相對(duì)于烹煮前呈下降趨勢(shì)，但仍是百分含量第一的化合物；在烹煮后多不飽和烯烴（6-丁烯基-1,4-環(huán)庚二烯、3-辛炔等）也無(wú)法檢測(cè)到；酯類化合物在烹煮后百分含量較烹煮前明顯上升。我們可以認(rèn)為，烹煮前后縊蟶風(fēng)味差異是由于醛類化合物百分含量的降低和酯類化合物百分含量的升高造成的。此外，微藻的醇、醛、酮類等揮發(fā)性化合物常常通過脂氧合酶對(duì)脂肪酸進(jìn)行分解產(chǎn)生，本研究在 NCBI查找假微型海鏈藻基因組，發(fā)現(xiàn)與脂肪氧化相關(guān)序列命名為脂肪酸

6、羥化酶（FAH，fatty acid hydroxylase），通過將FAH進(jìn)行體外全長(zhǎng)克隆，并連接轉(zhuǎn)化形成重組子FAH-pET-28a，轉(zhuǎn)化大腸桿菌表達(dá)菌株BL21set，用0.5mM的IPTG進(jìn)行原核表達(dá)誘導(dǎo)，并通過 SDS-PAGE和 Western Blot進(jìn)行表達(dá)蛋白檢測(cè)。結(jié)果顯示，F(xiàn)AH全長(zhǎng)1602bp，為一個(gè)完整的編碼匡，蛋白編碼533個(gè)氨基酸，分子量約為56.7KDa，能成功在體外進(jìn)行表達(dá)，表達(dá)蛋白主要以包涵體形式存在，