Notch信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在胃癌中的表達(dá)及其意義.pdf

1、目的：研究Notch信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中Notch1和NUMB基因在胃癌組織、正常組織和不同分化程度的胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況及其與臨床病理特征的關(guān)系；在此基礎(chǔ)上探討通過RNA干擾技術(shù)沉默Notch1基因進(jìn)而影響胃癌細(xì)胞的增殖和浸潤轉(zhuǎn)移能力的可能性；同時(shí)通過在胃癌細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)NUMB基因，探索其對(duì)胃癌細(xì)胞功能和惡性生物學(xué)行為的影響，以期進(jìn)一步明確在胃癌中NUMB基因調(diào)控Notch信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的機(jī)制，為未來腫瘤的基因治療提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基

2、礎(chǔ)。
　　 方法：(1)隨機(jī)選取上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院普外科2009年1月～2009年10月接受胃癌根治術(shù)的病人，共40例。所有病例均經(jīng)病理證實(shí)，且術(shù)前未行放化療，病人均知情同意。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)和Western印跡法(Western blot)分別檢測(cè)胃癌病人腫瘤組織和相應(yīng)正常組織內(nèi)Notch1和NUMB的表達(dá)，并分析兩者的表達(dá)情況與腫瘤浸潤深度、淋巴轉(zhuǎn)移、分化程度、疾病分期等臨床病

3、理學(xué)特征的關(guān)系以及兩者表達(dá)的相關(guān)性。(2)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western印跡法分別檢測(cè)不同分化程度的胃癌細(xì)胞和正常胃黏黏膜上皮細(xì)胞Notch1和NUMB mRNA及其蛋白的表達(dá)水平。(3)構(gòu)建RNA干擾真核表達(dá)載體靶向抑制低分化胃腺癌BGC-823細(xì)胞內(nèi)的Notch1表達(dá)，檢測(cè)RNA干擾對(duì)胃癌細(xì)胞體外的增殖、遷移和侵襲能力的變化以及對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。(4)構(gòu)建NUMB真核表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染低分化胃腺癌BGC-823細(xì)胞，檢測(cè)NUMB

4、基因過表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞體外增殖、遷移和侵襲能力的變化以及對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。
　　 結(jié)果：(1)Notch1 mRNA在胃癌中表達(dá)水平明顯升高，其平均表達(dá)水平是正常胃組織的1.67倍，并且兩組表達(dá)量的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。NUMB mRNA在胃癌中表達(dá)水平明顯降低，在胃癌中的平均表達(dá)水平僅是正常胃組織的0.597倍，并且兩組表達(dá)量的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Notch1 mRNA在胃癌中的表達(dá)與腫瘤的分化程度和淋

5、巴轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，NUMB mRNA在胃癌中的表達(dá)僅與腫瘤分化程度有關(guān)(P<0.05)。Notch1和NUMB在胃癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.459，P<0.05)。胃癌腫瘤組織中Notch1蛋白的相對(duì)含量分別為0.348±0.133，明顯高于正常組織中Notch1蛋白相對(duì)含量的0.208±0.140(P<0.05)，胃癌腫瘤組織中NUMB蛋白的相對(duì)含量分別為0.490±0.440，明顯低于正常組織中NUMB蛋白相對(duì)

6、含量的0.746±0.390(P<0.05)。(2)Notch1 mRNA和蛋白在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)水平均高于正常胃黏膜上皮細(xì)胞，不同分化程度的胃癌細(xì)胞間Notch1 mRNA相對(duì)表達(dá)量均有顯著差異(P<0.05)。NUMB mRNA和蛋白在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)水平均低于正常胃黏膜上皮細(xì)胞，但不同分化程度的胃癌細(xì)胞間NUMB mRNA相對(duì)表達(dá)量均無明顯差異(P>0.05)。(3)RNA干擾后低分化胃腺癌BGC-823細(xì)胞的Notch1 mRN

7、A和蛋白表達(dá)水平明顯下降(P<0.05)，與空白對(duì)照組(只加脂質(zhì)體)和陰性對(duì)照組(轉(zhuǎn)染不針對(duì)任何靶基因的shRNA)相比，細(xì)胞增殖能力顯著下降(P<0.05)，體外遷移和侵襲能力明顯降低(P<0.05)，細(xì)胞凋亡率明顯升高(P<0.05)。(4)NUMB基因過表達(dá)的低分化胃腺癌BGC-823細(xì)胞，與空白對(duì)照組(只加脂質(zhì)體)和空載質(zhì)粒組(轉(zhuǎn)染不含NUMB基因的質(zhì)粒)相比，細(xì)胞增殖能力顯著下降(P<0.05)，體外遷移和侵襲能力明顯降低(P

8、<0.05)，細(xì)胞凋亡率明顯升高(P<0.05)。與Notch1RNA干擾組相比，NUMB過表達(dá)組的細(xì)胞增殖能力下降更為明顯，體外侵襲能力下降更為明顯(P<0.05)。
　　 結(jié)論：(1)胃癌腫瘤組織中的Notch1 mRNA和蛋白水平顯著高于正常組織，且與腫瘤細(xì)胞的分化程度和淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)，而NUMBmRNA和相應(yīng)蛋白在胃癌腫瘤組織中則呈現(xiàn)低表達(dá)，且與Notch1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。(2)胃癌腫瘤細(xì)胞中Notch1 mRNA和蛋白的

9、表達(dá)水平高于正常胃黏膜上皮細(xì)胞，而NUMB mRNA和蛋白在胃癌細(xì)胞中則呈現(xiàn)低表達(dá)。在低分化胃腺癌BGC-823細(xì)胞中Notch1 mRNA的表達(dá)水平分別高于中分化和高分化的胃腺癌細(xì)胞。(3)Notch1基因表達(dá)量的下降可以顯著抑制低分化胃腺癌BGC-823細(xì)胞的增殖，降低細(xì)胞的遷移和侵襲能力，并能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。(4)NUMB基因過表達(dá)可以顯著抑制低分化胃腺癌BGC-823細(xì)胞的增殖，降低細(xì)胞的遷移和侵襲能力，并能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，