胃癌中PI3K-Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)基因變異的生物學(xué)意義.pdf

1、磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是近年來發(fā)現(xiàn)的一條參與細胞增殖調(diào)控的重要信號通路,PI3K和Akt是該通路的中心環(huán)節(jié)。該通路經(jīng)生長因子受體活化后,可參與細胞周期的調(diào)控,調(diào)節(jié)細胞生長、增殖以及凋亡等,并參與血管生成、端粒酶活性和細胞侵襲等諸多重要的生命活動過程。研究發(fā)現(xiàn),該通路上的多個基因在腫瘤中存在變異,并且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系。
　　我們的前期實驗中,利用Oligo基因芯片技術(shù)建立了胃癌基

2、因表達譜,其中發(fā)現(xiàn)PI3Ks和Akt家族在胃癌組織中存在差異表達。通過結(jié)腸癌蛋白表達譜的建立,發(fā)現(xiàn)了與PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)的基因Galectin-3以及新基因MFAP3L在結(jié)腸癌中表達明顯上調(diào)。為了重點闡明PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中一組參與腫瘤細胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因PIK3CA、AKT2、Glaectin-3以及MFAP3L在同一組胃癌標(biāo)本中的表達情況,并探明PIK3CA、AKT2基因激酶區(qū)DNA的變異情況,以

3、期對胃癌發(fā)生的病因及腫瘤的臨床治療提供線索。本項研究采用半定量RT-PCR、免疫印跡以及組織微陣列免疫組化等方法驗證了這一組基因在胃癌細胞系和胃癌組織中 mRNA及蛋白表達水平的變化,并分析了它們之間變化的相互關(guān)系。在此基礎(chǔ)上,進一步通過變性高壓液相色譜技術(shù)(DHPLC)以及DNA測序技術(shù)篩查了PIK3CA基因以及AKT2基因在胃癌細胞系以及胃癌組織中的突變及多態(tài)位點。結(jié)果表明, PIK3CA基因在胃癌細胞系及胃癌組織中表達上調(diào)[胃癌組

4、織中mRNA表達上調(diào)為70％(19/29),P=0.01];PIK3CA基因在激酶區(qū)的第9外顯子1634位點發(fā)生A→C的改變(胃癌細胞系,1/10;胃癌組織,0/30),在第18外顯子2730位點存在A→G突變(胃癌細胞系,3/10;胃癌組織,1/30,3.3%)。AKT2在胃癌細胞系及胃癌組織中表達上調(diào)[胃癌組織中mRNA表達上調(diào)為56%(14/25),P=0.023];AKT2基因在激酶區(qū)的第6外顯子存在A652G多態(tài)位點(胃癌組織

5、1/50,2%),在第6內(nèi)含子43377位點存在G→C的突變(胃癌細胞系1/10;胃癌組織1/50,2%),在第9內(nèi)含子存在A48877G多態(tài)位點(胃癌組織9/50,18%)。MFAP3L與 Glaectin-3在胃癌組織中表達上調(diào)[IHC陽性著色率分別為70.8%(17/24)與64.0%(16/25),P=0.027與P=0.017]。
　　上述研究表明,PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中與細胞的增殖、侵襲相關(guān)的一組基因PIK3C