MiR-517a和MiR-517c在肝癌中的作用研究.pdf

1、MiRNAs是一類可以負(fù)性調(diào)控基因表達(dá)的小的非編碼RNA。越來越多的研究表明，一些miRNAs在腫瘤發(fā)生中起到類似腫瘤抑癌基因的作用，而這一作用與腫瘤中表觀遺傳學(xué)機(jī)制異常有密切的關(guān)系。為了在肝細(xì)胞癌中尋找和鑒定具有類似功能的miRNAs，我們首先聯(lián)合應(yīng)用兩種抗腫瘤藥物5-氮-2’-脫氧胞苷(5-aza-2'deoxycytidine，DAC)和曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)分別處理八個(gè)肝細(xì)胞癌細(xì)胞株:YY8103,

2、 HepG2, MHCC97-H, MHCC97-L, Hep3B, Huh7, SK-hep-1和FOCUS，分析了處理前后人類723個(gè)miRNAs的表達(dá)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，19號(hào)染色體上的一個(gè)最大的miRNA cluster(C19MC)的表達(dá)水平在部分細(xì)胞株中明顯升高。該區(qū)域位于19q13.41，包含43個(gè)miRNA，通過對(duì)43個(gè)miRNA的細(xì)胞活力篩選試驗(yàn)表明，過表達(dá)miR-517a和miR-517c可以抑制部分肝癌細(xì)胞的生長和增殖

3、，使細(xì)胞周期停滯在G2/M期。另一方面，MiR-517a和MiR-517c的表達(dá)下調(diào)可以促進(jìn)HepG2，MHCC97-H,MHCC97-L細(xì)胞的貼壁非依賴性軟瓊脂克隆形成能力。我們還應(yīng)用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證了生物信息學(xué)方法對(duì)miR-517a和miR-517c靶基因的分析，結(jié)果表明，Pyk2是miR-517a和miR-517c的一個(gè)直接作用調(diào)控的靶基因。結(jié)合miR-517a和miR-517c在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)下調(diào)的情況，我們得出以下結(jié)