轉(zhuǎn)移相關(guān)的mir-185、mir-19在肝癌中的驗(yàn)證性研究及mir-19功能的初步探討.pdf

1、目的：本課題擬對早期肝癌患者中mir-19和mir-185這兩個分子標(biāo)記物的可靠性及應(yīng)用價(jià)值進(jìn)一步研究。同時(shí)比較不同轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞系中mir-19和mir-185的表達(dá)變化，探討mir-19在腫瘤轉(zhuǎn)移過程的生物學(xué)功能，并對mir-19影響肝癌轉(zhuǎn)移機(jī)制做一初步的探討。
　　 方法：首先應(yīng)用Taqman MGB探針法定量分析了mir-19和mir-185在95例早期肝細(xì)胞性癌的表達(dá)情況，結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析其在復(fù)發(fā)組與非復(fù)發(fā)組間的差

2、異以及其與早期肝癌患者生存預(yù)后的關(guān)系。隨后提取細(xì)胞MHCC97H、LM3、HepG2和7402的總RNA，通過反轉(zhuǎn)錄獲得這兩個miRNA的cDNA，并應(yīng)用Taqman MGB探針法對其定量分析。接著，外源性干擾mir-19在這四個不同轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞中的表達(dá)，探討其對細(xì)胞侵襲、增殖能力的影響。并結(jié)合生物信息學(xué)，初步探討mir-19的調(diào)控機(jī)制。
　　 結(jié)果：在早期肝癌組織中，mir-19和mir-185的表達(dá)水平在復(fù)發(fā)組與非復(fù)發(fā)組有顯

3、著的差異（P<0.05），這兩個因子均在復(fù)發(fā)組較無復(fù)發(fā)組下調(diào)表達(dá)。根據(jù)ROC曲線確定預(yù)測概率分類點(diǎn)，將患者根據(jù)miRNAs的表達(dá)情況分為高表達(dá)-低風(fēng)險(xiǎn)組和低表達(dá)-高風(fēng)險(xiǎn)組，Kaplan-Meier生存分析表明，mir-19高表達(dá)組的至復(fù)發(fā)時(shí)間（TTR）明顯長于低表達(dá)組（P<0.05），mir-185高表達(dá)組的總生存時(shí)間（OS）和至復(fù)發(fā)時(shí)間（TTR）均顯著長于低表達(dá)組。應(yīng)用COX風(fēng)險(xiǎn)比例模型分析表明，mir-19和mir-185為預(yù)測肝癌

4、術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立保護(hù)性因素。在不同轉(zhuǎn)移潛能的細(xì)胞系中，mir-19和mir-185表達(dá)水平差異明顯（P<0.05），高轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞系較低轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞系表達(dá)下調(diào)，功能實(shí)驗(yàn)顯示mir-19可抑制肝癌細(xì)胞的侵襲和增殖（P<0.05），利用生物信息學(xué)預(yù)測mir-19的靶基因發(fā)現(xiàn)，許多癌基因3’UTR包含與mir-19結(jié)合的互補(bǔ)序列。
　　 結(jié)論：早期肝癌復(fù)發(fā)組與非復(fù)發(fā)組間mir-19和mir-185的表達(dá)存在顯著的差異，mir-19和mi