rno-miR-122與rno-miR-182在對ACI大鼠移植性肝癌經(jīng)動脈栓塞的相關功能性研究.pdf

1、目的：探討經(jīng)動脈栓塞對ACI大鼠移植性肝癌中microRNA(miRNA)相對表達水平和潛在功能的影響，尋找與肝癌發(fā)生發(fā)展相關的miRNAs，并進行miRNAs相關功能研究，為尋找評估療效及生存預后的生物標志物提供線索。
　　材料與方法：30只ACI大鼠隨機為A、B兩組，每組15只。30只ACI大鼠均被行肝癌移植。A組動物在肝癌移植14d后予經(jīng)動脈栓塞，B組未行經(jīng)動脈栓塞。A組在TAE術前以及術后7d，測量腫瘤表面最大長徑(a)和

2、垂直短徑(b)，計算體積。B組則在腫瘤移植14d后測量腫瘤表面最大長徑(a)和垂直短徑(b)，計算體積。在TAE7d后采集A組的肝癌組織和癌旁組織。B組在肝癌移植14d后采集的肝癌組織和癌旁組織。采取的標本用TRIzol法抽提總RNA后利用Illumina Solexa平臺行高通量深度測序，對測序結果進行分析，表達差異顯著者作為候選miRNA。利用Taqman qRT-PCR方法驗證其在各對組織樣本中的相對表達水平;利用生物信息學軟件預

3、測備選miRNA的靶基因。再利用分子克隆技術構建表達載體，轉(zhuǎn)入HEK293T細胞中以獲得目的基因的表達，并用雙熒光檢測。
　　結果：30只大鼠肝癌均移植成功。A組TAE前與B組的腫瘤體積無統(tǒng)計學顯著性差異(A組體積0.474±0.181 cm3，B組體積0.517±0.197cm3，P=0.211)，其中A組TAE前與TAE術后7d的腫瘤體積存在統(tǒng)計學顯著性差異（A組術前體積0.474±0.181 cm3，A組術后體積0.329±

4、0.140 cm3，P=0.001），腫瘤體積明顯縮小。rno-miR-122在組織樣本中相對表達水平的低通量qRT-PCR驗證結果顯示，rno-miR-122在未接受經(jīng)動脈栓塞的癌組織中相對低表達(P=1.3e-10)，在接受經(jīng)動脈栓塞并且縮小的癌組織中表達較術前上調(diào)(P=0.03)，與高通量的測序結果一致;利用大量的生物信息學模型計算，我們分析預測并得到rno-miR-182所作用的潛在靶基因cebpa及其與rno-miR-122間

5、的信號通路，并在大鼠肝癌和癌旁組織中的得到表達驗證。通過對HEK293T細胞進行轉(zhuǎn)染及雙熒光報告基因檢測，進一步證實了Cebpa是miR-182的直接靶基因。
　　結論：經(jīng)動脈栓塞能夠使大鼠肝癌腫瘤體積縮小，rno-miR-122在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著抑癌的作用，TAE后rno-miR-122表達上升。本研究結果表明，在肝癌中miR-182高表達進而對Cebpa抑制，而Cebpa的抑制進一步抑制miR-122的表達，激活整個通