經(jīng)大鼠脾動(dòng)脈肝細(xì)胞移植的研究.pdf

1、目的：探討SD大鼠原代肝細(xì)胞分離的影響因素和方法；建立經(jīng)SD大鼠頸動(dòng)脈途徑脾動(dòng)脈插管肝細(xì)胞移植的動(dòng)物模型，探討脾動(dòng)脈與脾臟直接注射兩種途徑肝細(xì)胞移植治療急性肝衰竭(Acute hepaticfailure，AHF)大鼠的療效。
　　方法：大鼠肝細(xì)胞的分離采用兩步法，并在灌注條件等多方面加以改進(jìn)。采用D-氨基半乳糖(D-gal)誘導(dǎo)大鼠的AHF24h后，65只大鼠經(jīng)頸動(dòng)脈途徑脾動(dòng)脈插管，60只成功后隨機(jī)分為3組：Ⅰ組(n=20)經(jīng)脾

2、臟直接注射約2×107個(gè)肝細(xì)胞、肝動(dòng)脈注射0.4 ml Hank’s液；Ⅱ組(n=20)經(jīng)脾臟直接注射0.4 ml Hank's液、脾動(dòng)脈注射2×107個(gè)肝細(xì)胞；Ⅲ組(n=20)經(jīng)脾臟直接注射0.4 ml Hank's液、肝動(dòng)脈注射0.4ml Hank's液。觀察每組大鼠的生存率及肝功能變化情況，追蹤脾動(dòng)脈移植熒光示蹤劑CFDA SE標(biāo)記的肝細(xì)胞，HE染色觀察脾內(nèi)肝細(xì)胞病理變化和免疫熒光觀察白蛋白合成作用情況。
　　結(jié)果：大鼠肝細(xì)

3、胞分離存活率達(dá)85％-95％。Ⅰ組14 d存活率顯著高于Ⅱ組(P=0.031，<0.05)，Ⅱ組14 d存活率也高于Ⅲ組(P=0.048，<0.005)；Ⅰ、Ⅱ組都能明顯改善AHF大鼠的肝功能，尤其以Ⅰ組最為顯著；Ⅱ組CFDA SE熒光標(biāo)記的肝細(xì)胞經(jīng)脾動(dòng)脈移植7d后，受體大鼠脾臟和肝臟可以看到散在綠色熒光分布；Ⅰ、Ⅱ組移植14 d后，白蛋白共焦免疫熒光結(jié)果表明，脾內(nèi)有肝細(xì)胞白蛋白綠色熒光信號(hào)；Ⅰ、Ⅱ組移植7 d后，HE染色可以看到肝細(xì)胞