miR-1011和miR-318在DNA損傷應(yīng)答的功能.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、基因組的穩(wěn)定性不斷地被DNA損傷挑戰(zhàn),每天每個(gè)細(xì)胞遭受數(shù)十萬次DNA損傷事件。這些DNA損傷事件由正常細(xì)胞代謝廢物或者DNA復(fù)制壓力導(dǎo)致,也可以由輻射和環(huán)境中化學(xué)毒物導(dǎo)致。在淋巴細(xì)胞和生殖細(xì)胞,DNA損傷也可能由基因組重排引起。DNA損傷可以干預(yù)DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄,并導(dǎo)致基因突變和染色體斷裂紊亂。DNA損傷應(yīng)答系統(tǒng)維持著基因組的穩(wěn)定性,消除DNA損傷的不利結(jié)果,阻止它們向子代細(xì)胞傳遞。DNA損傷應(yīng)答系統(tǒng)的缺陷將導(dǎo)致衰老和各種紊亂包括發(fā)育缺

2、陷、退行性神經(jīng)性疾病和腫瘤的發(fā)生。因此,一個(gè)有效的DNA損傷應(yīng)答系統(tǒng)對于細(xì)胞和有機(jī)體的生存是非常重要的。
  miRNA是一種大小約18bp~22bp、非編碼RNA分子。miRNA主要通過結(jié)合靶基因mRNA3'UTR區(qū)域的miRNA結(jié)合元件來調(diào)節(jié)靶基因轉(zhuǎn)錄后水平,其調(diào)節(jié)靶基因轉(zhuǎn)錄后沉默通過同源mRNA的特異性切割或者特異性抑制蛋白質(zhì)合成兩種方式。近來研究鑒定出了miRNA成熟所必需的多種亞單位蛋白復(fù)合體并將其命名為微處理器。微處理

3、器包括:Drosha、RNaseⅢ核酸內(nèi)切酶和DGCR8。據(jù)預(yù)測在人類大約有2000個(gè)miRNA,超過900個(gè)miRNA已經(jīng)被證實(shí),調(diào)節(jié)人類30%的基因。miRNA除了在正常發(fā)育和細(xì)胞生理過程中發(fā)揮著重要的功能,隨著研究發(fā)現(xiàn)miRNA功能的紊亂有助于人類疾病的發(fā)生,其紊亂可以導(dǎo)致神經(jīng)退行性疾病、腫瘤、心腦血管疾病等一系列疾病的發(fā)生。DNA損傷時(shí)DNA損傷應(yīng)答基因在轉(zhuǎn)錄水平和轉(zhuǎn)錄后水平被調(diào)節(jié)。miRNA作為一個(gè)非編碼RNA,在DNA損傷時(shí)

4、也可以轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平被調(diào)節(jié)。
  目的:
  有大量研究已經(jīng)在體外對DNA損傷時(shí)miRNA的功能進(jìn)行了研究。然而,在果蠅體內(nèi)miRNA對DNA損傷反應(yīng)還缺乏系統(tǒng)性研究。本研究以果蠅為模型,初步分析了miRNA在DNA損傷應(yīng)答中的功能。
  方法:
  1本實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)人員通過RNA-seq方式篩選出了46個(gè)p53依賴性和非依賴性差異表達(dá)的miRNAs。
  2利用分子克隆技術(shù)構(gòu)建了miRNAs gRNA

5、質(zhì)粒和miRNAs轉(zhuǎn)基因質(zhì)粒。
  3通過離子輻照敏感性實(shí)驗(yàn),研究了mir-1011、mir-318、mir-278、mir-8、mir-932、mir-274、mir-9c、mir-375果蠅突變體對DNA損傷敏感性檢測。
  4通過BrdU染色實(shí)驗(yàn),檢測了miR-1011和miR-318突變對G1/S細(xì)胞周期檢驗(yàn)點(diǎn)的影響。
  5通過PH3染色實(shí)驗(yàn),檢測了miR-1011和miR-318突變對G2/M細(xì)胞周期檢驗(yàn)點(diǎn)

6、的影響。
  結(jié)論:
  1本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建21個(gè)miRNAs gRNA質(zhì)粒和22個(gè)miRNAs轉(zhuǎn)基因質(zhì)粒。
  2通過γ-輻照敏感實(shí)驗(yàn),本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)mir-1011、mir-318、mir-278突變果蠅對輻照非常敏感;mir-8突變果蠅對輻照微弱敏感;mir-932突變果蠅對輻照產(chǎn)生抵抗;mir-274、mir-9c、mir-375突變果蠅對輻照不敏感。
  3本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)mir-1011主要通過調(diào)節(jié)G1/S細(xì)胞周

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