番茄microRNA Sly-mir156a和Sly-mir169c的功能鑒定.pdf

1、番茄是重要的蔬菜作物，其遺傳改良的重要途徑就是尋找并利用能夠調(diào)節(jié)植物發(fā)育，包括株高、葉片數(shù)等重要園藝性狀的基因和對(duì)環(huán)境適應(yīng)，包括干旱、低溫等非生物逆境適應(yīng)的基因，microRNA就屬于這類(lèi)基因。
　　 microRNA是廣泛存在于真核生物中的重要的調(diào)節(jié)因子，在植物和動(dòng)物中的研究發(fā)現(xiàn)其功能是多樣的，且在生物體內(nèi)有著很重要的調(diào)節(jié)功能，包括生長(zhǎng)發(fā)育、逆境應(yīng)答、激素反應(yīng)和病毒誘導(dǎo)等眾多方面。
　　 本研究以番茄作為材料，根據(jù)前人

2、研究從microRNA數(shù)據(jù)庫(kù)中選取了番茄microRNA家族中Sly-mir156a和Sly-mir169c這兩個(gè)miRNA，分別構(gòu)建其超量表達(dá)載體并轉(zhuǎn)入番茄中，分析它們?cè)诜阎械墓δ?，并借助生物信息學(xué)的手段預(yù)測(cè)它們?cè)诜阎械陌谢颍治隽祟A(yù)測(cè)所得靶基因在相應(yīng)條件下的表達(dá)情況，期望能夠獲得有應(yīng)用價(jià)值的microRNA信息。研究獲得的主要結(jié)果如下：
　　 1.克隆了從數(shù)據(jù)庫(kù)中選取的番茄兩個(gè)microRNA前體基因，并構(gòu)建了相應(yīng)的超

3、量表達(dá)載體；
　　 2.通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將上述構(gòu)建的兩個(gè)表達(dá)載體轉(zhuǎn)入番茄中，獲得轉(zhuǎn)基因番茄植株，并通過(guò)了PCR及Southern雜交驗(yàn)證，證實(shí)目的基因整合到番茄基因組；
　　 3.利用RT-PCR技術(shù)驗(yàn)證了目的基因的超量表達(dá)；
　　 4.通過(guò)對(duì)Sly-mir156a轉(zhuǎn)基因T1代株系的觀(guān)察，得到區(qū)別于對(duì)照的相應(yīng)表型，轉(zhuǎn)基因植株表現(xiàn)出矮小、葉片變多變小、節(jié)間縮短等特征，利用real-timePCR技術(shù)分析

4、了其不同靶基因在不同組織中的表達(dá)情況，為番茄園藝性狀特別是形態(tài)建成的遺傳改良提供了依據(jù)；
　　 5.將Sly-mir169c轉(zhuǎn)基因T1代株系進(jìn)行干旱及鹽逆境的脅迫處理，轉(zhuǎn)基因株系與對(duì)照表現(xiàn)出不同反應(yīng)，前者表現(xiàn)出對(duì)上述非生物逆境良好的抵抗能力。對(duì)轉(zhuǎn)基因和對(duì)照植株的氣孔進(jìn)行了觀(guān)察，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因株系的氣孔大小和氣孔導(dǎo)度相比對(duì)照有顯著降低，說(shuō)明Sly-mir169c通過(guò)調(diào)控氣孔的開(kāi)關(guān)降低水分的蒸騰從而提高植物的抗旱能力。同樣也利用real