爬山虎葉斑病病原菌的分離、鑒定及生物學(xué)特性分析.pdf

1、爬山虎葉斑病是爬山虎中為害較為嚴(yán)重的病害之一，其病害不僅嚴(yán)重影響了爬山虎的生長(zhǎng)，也影響城市園林垂直綠化和交通通道護(hù)坡的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本論文對(duì)采集自河南省洛陽市欒川縣龍峪灣爬山虎葉斑病葉，進(jìn)行常規(guī)組織分離純化，結(jié)合形態(tài)學(xué)和 PCR分子鑒定，鑒定出引起該種病害的病原菌，為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)該病害，以及該病害預(yù)防及綜合治理提供更多的理論依據(jù)。主要結(jié)論如下：
　　通過對(duì)該病危害癥狀觀察，該病主要為害爬山虎的葉片，初期發(fā)病時(shí)有褐色的小點(diǎn)，然后逐漸擴(kuò)大為

2、圓形、近圓形或不規(guī)則形的黃褐色病斑，邊緣組織有明顯的深褐色凸起，病斑中央散生分生孢子盤的黑色小點(diǎn)，發(fā)病后期病斑連接成一片，病斑中央易穿孔，嚴(yán)重時(shí)造成大量落葉。高溫高濕的環(huán)境下易發(fā)病。通過柯赫氏法則進(jìn)行分離純化，并對(duì)病原菌培養(yǎng)菌落形狀及在光學(xué)顯微鏡下對(duì)分生孢子梗和分生孢子形態(tài)進(jìn)行觀察。病菌分生孢子紡錘形，頂細(xì)胞生2~4根不分枝的無色附屬絲，中間有2~3個(gè)淡褐色的細(xì)胞，具有3~4個(gè)隔膜，基細(xì)胞偏生或中間生一根無色的附屬絲。初步鑒定出該病原菌

3、為數(shù)絲頂多毛孢(Bartalinia robillardoides Tassi)。進(jìn)一步通過 PCR對(duì) rDNA-ITS區(qū)段(ITS1、ITS2)擴(kuò)增、測(cè)序，在GenBank中進(jìn)行Blast搜索和比對(duì)分析。根據(jù)rDNA-ITS序列分析結(jié)果確定所分離的病原菌為半知菌中的數(shù)絲頂多毛孢。為進(jìn)一步驗(yàn)證其致病性，我們對(duì)該病原菌進(jìn)行了反接驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)接種所分離的數(shù)絲頂多毛孢可導(dǎo)致與接種病原菌一致的發(fā)病癥狀，進(jìn)一步驗(yàn)證了我們所分離的病原菌為B. rob

4、illardoides。這是首次明確報(bào)道數(shù)絲頂多毛孢可引起植物葉部病害。
　　對(duì)數(shù)絲頂多毛孢的生物學(xué)特性進(jìn)行了初步研究。測(cè)定了在不同溫度、不同pH值、不同光照、不同碳氮源的條件下對(duì)數(shù)絲頂多毛孢生長(zhǎng)和產(chǎn)孢量的影響，為爬山虎病原菌研究提供理論依據(jù)。結(jié)果顯示，溫度會(huì)促進(jìn)病原菌的生長(zhǎng)，其能正常生長(zhǎng)的溫度范圍為15~35℃，而在25℃條件下生長(zhǎng)最旺盛、產(chǎn)孢量最大，菌絲以及分生孢子的致死溫度為60℃，10 min。病菌在 pH值為4~11范圍